サイレンシングTNFAIP8はマウスマクロファージRAW264.7のマイグレーション機能を抑制【JST・京大機械翻訳】

Yang Fei; Wu Suxia; Feng Shiming; Liu Guangchao; Chai Lihui

文献

J-GLOBAL ID：201602289414585207 整理番号：16A0952357

サイレンシングTNFAIP8はマウスマクロファージRAW264.7のマイグレーション機能を抑制【JST・京大機械翻訳】

TNFAIP8 gene silencing inhibits the migration of mouse RAW264.7 macrophages

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巻： 36 号： 4 ページ： 288-293 発行年： 2016年
JST資料番号： C2322A ISSN： 0254-5101 CODEN： ZWMZDP 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：中国語 (ZH)

腫瘍の壊死因子Α誘導蛋白質8(TUMOR NECROSIS FACTOR ALPHA-INDUCED PROTEIN8, TNFAIP8)SHRNAレンチウイルス発現ベクターが,構築を目的とした。マウスマクロファージ細胞RAW264.7中のサイレンシングTNFAIP8遺伝子の発現により,TNFAIP8遺伝子サイレンシングのマクロファージの細胞機能への影響を検討した。方法で合成TNFAIP8の特異的SHRNA配列を設計し,アニーリング後連突入PLKO.1-TRC担体TNFAIP8 SHRNAレンチウイルス発現ベクターは,制限エンドヌクレアーゼ分解と遺伝子同定ベクター配列の正確性を構築するシークエンシングを構築した;293T細胞をレンチウイルス粒子を調製し,レンチウイルス粒子感染RAW264.7細胞における,サイレンシングTNFAIP8遺伝子はこの細胞において発現し,トランスフェクションした蛍光定量的RT-PCRとWESTERN BLOT検出TNFAIP8の遺伝子発現および蛋白質レベルの遺伝子サイレンシングの効果を実証する。遺伝子サイレンシングは,培養RAW264.7細胞と対照群の細胞を,接着試験およびスクラッチ試験観察TNFAIP8サイレンシングはRAW264.7細胞の接着および移動能力への影響を治癒ディスク。結果は二重酵素消化電気泳動結果構築したSHRNAレンチウイルスベクターの制限酵素フラグメント相対分子質量の大きさが正しいことを,遺伝子のシークエンシングも挿入す配列が正しいことを結果を示した。蛍光定量的RT-PCRとWESTERN BLOTの結果は遺伝子サイレンシングは細胞におけるTNFAIP8の遺伝子とタンパク質発現レベルは対照群の細胞よりいずれも有意に低下した(P<0.05)を示した。接着シャーレ試験の結果,15MIN、30 MINと2Hの接種後に,サイレンシングは細胞接着培養皿の底面上の細胞数は,対照群細胞(P<0.05)より有意に少なかった。考えられることがわかった。12時間培養後,対照群の細胞と比較すると,サイレンシングTNFAIP8のRAW264.7細胞の仮足の数は少なく,また突起は明らかでなかった。サイレンシングは細胞スクラッチ癒合率はスクラッチ試験の結果,スクラッチ24 時間後,対照群胞Hua痕面積を有意に縮小治癒,癒合率を50%前後に達しスクラッチにわずか,対照群細胞(P<0.05)より有意に低かった。25%程度であった結論:TNFAIP8SHRNAレンチウイルス発現ベクターを成功裏に構築し,このベクターはTNFAIP8遺伝子の発現に対して良好なサイレンシング効果を持つ;マウスマクロファージRAW264.7においてサイレンシングTNFAIP8の発現はマクロファージ細胞の接着と移動能力を著しく抑制することができる。Data from the ScienceChina, LCAS.【JST・京大機械翻訳】

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生薬の薬理の基礎研究 , 消炎薬の基礎研究

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