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J-GLOBAL ID:201702214614496520   整理番号:17A0109738

PULL-DOWN法を用いて,ニワトリB-LB分子におけるIAの活性フラグメントを得た。【JST・京大機械翻訳】

Obtaining Active Segments in Chicken (Gallus gallus) B-LB Molecule to Bind with Invariant Chain by Pull-down Method
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巻: 24  号: 10  ページ: 1474-1481  発行年: 2016年 
JST資料番号: C2715A  ISSN: 1674-7968  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: 中国 (CHN)  言語: 中国語 (ZH)
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本研究は鶏(GALLUS GALLUS)の主要な組織適合性複合体(MAJOR HISTOCOMPATIBILITY COMPLEX)を明らかにすることを目的とした。本論文では,抗原ペプチドにおけるクラスII分子とIIの作用機序を理解し,深く研究した。実験室で保存されたB-LB遺伝子のCDNAから3つの構造フラグメントをそれぞれ原核と真核細胞発現プラスミドに挿入し、それぞれそれをそれぞれ共形質移入した。誘導発現後、アフィニティークロマトグラフィーとプルダウン(PULL-DOWN)、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SODIUM 種々の SULFATE POLYACRYLAMIDE GEL ELECTROPHORESIS,SDS-PAGE)を用いて、その純度と形成された複合体を測定した。その後、免疫ブロット法(WESTERN BLOT)を用いて、複合物の性質及び真核発現を検証し、これらの断片の細胞内での発現と定位を検証した。まず最初に,3つの組換えプラスミドPGEX-4T-1-B-LB-S1,PGEX-4T-1-B-LB-Β1およびPGEX-4T-1-B-LB-Β_2TCは,標的蛋白質B-LB-SΒ1,B-LB-Β1およびB-LB-Β2TCを発現することができた。精製された。第二に,共Β1とB-LB-Β1は,共発現とPULL-DOWNにおいてIIと複合体を形成することができ,B-LB-Β2TCはIIと結合することができず,ウエスタンブロットの結果は以下のことを示した。特異的抗体はPOLL-DOWNに結合されたこれら2つの標的蛋白質を識別することができた。最終的に,真核生物発現系において,B-LB-SΒ1とB-LB-Β1は,293T細胞におけるB分子の局在化機能を維持することができ,B-LB-Β_2TCは,この位置決め機能を喪失することを立証した。本研究の結果は,クラスII分子結合IIの活性フラグメントの証拠を初めて提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
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