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J-GLOBAL ID：201702226720126279   整理番号：17A0299957

GHRHR-SV1抗体の調製とその蛋白質のメラノーマ細胞における発現【JST・京大機械翻訳】

Preparation of GHRHR-SV1 antibody and expression of its protein in melanoma cells

著者 (5件)： Guo Xiaolan (Center of Biology Experiment,Guangzhou Medical University) ,  Tan Yin (Center of Biology Experiment,Guangzhou Medical University) ,  Chen Wensheng (Center of Biology Experiment,Guangzhou Medical University) ,  Lin Yuyin (Center of Biology Experiment,Guangzhou Medical University) ,  Dai Jianwei (Center of Biology Experiment,Guangzhou Medical University)
資料名： Jilin Daxue Xuebao. Yixue Ban  (Jilin Daxue Xuebao. Yixue Ban)
巻： 42  号： 6  ページ： 1237-1242  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2934A  ISSN： 1671-587X  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的;成長ホルモン放出ホルモン受容体体剪接変1(GHRHR-SV1)抗体を調製し、そしてGHRHR-SV1蛋白の黒色腫細胞における発現状況を測定し、後続の腫瘍機序の研究に基礎を築いた。方法;GHRHR-SV1遺伝子配列を設計し,プラスミドPET-32A(+)に挿入し,PET-GHRHR-SV1組換えベクターを構築し,PCR及び配列決定により大腸菌BL21(DE3)に導入した。0,0.5,1.0,1.5および2.0MMOL・L(-1)イソプロピル-Β-D--(IPTG)をそれぞれ添加した。1,2,4および6時間の誘導後,37°C,30°Cおよび25°Cで異なる温度で誘導した。目的蛋白質発現の最適IPTG濃度,時間および温度を観察した。組換え蛋白質をアフィニティークロマトグラフィーにより精製し,精製した蛋白質をウサギに免疫し,ポリクローナル抗体を調製し,ELISA法により抗体価を検出し,ウェスタンブロット法によりメラニン-SV1蛋白質の発現を検出した。【結果】;組換えベクターPET-GHRHR-SV1の構築に成功した。IPTGの濃度が2.0MMOL L(-1)のとき,標的蛋白質の発現は最も高かった。IPTGにより誘導された蛋白質の発現は2時間後に最大値に達した。温度が25°Cのとき,蛋白質の発現は最大であった。発現した蛋白質の相対分子量は約24であり,精製後の純度は80%であり,GHRHR-SV1抗体価は1:1であり,B16-F10細胞にはGHRHR-SV1蛋白質の発現があった。結論;組換えベクターPET-GHRHR-SV1を首尾よく調製した。GHRHR-SV1蛋白質はIPTG濃度2.0MMOL・L(-1),誘導時間2時間および温度25°Cの条件下で発現した。高効率のGHRHR-SV1抗体の調製に成功した。黒色腫細胞系にはGHRHR-SV1蛋白発現がある。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ベクター ,  *タンパク質 ,  分子量 ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  ウェスタンブロット法 ,  純度 ,  ポリクローナル抗体 ,  ELISA ,  プラスミド ,  *抗体 ,  組換タンパク質 ,  抗体価
準シソーラス用語： 蛋白質発現 ,  大腸菌BL21(DE3) ,  遺伝子配列 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： growth hormone-releasing hormone receptor splice variant 1 ,  recombinant vector ,  recombinant protein ,  antibody ,  melanoma

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N)

タイトルに関連する用語 (5件)： 抗体 ,  調製 ,  蛋白質 ,  メラノーマ細胞 ,  発現