組換え型STREP-TAG ラベルの組換え発現と触媒特性を分析した。【JST・京大機械翻訳】

Lv Ning; Li Xuejun; Chen Peng

文献

J-GLOBAL ID：201702238088909065 整理番号：17A0109817

組換え型STREP-TAG ラベルの組換え発現と触媒特性を分析した。【JST・京大機械翻訳】

Recombinant Expression and Catalytic Properties Analysis of Serratia marcescens Nuclease Fused with Strep-tagII

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巻： 24 号： 6 ページ： 899-907 発行年： 2016年
JST資料番号： C2715A ISSN： 1674-7968 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：中国語 (ZH)

霊(SERRATIA MARCESCENS)ヌクレアーゼの効率的な核酸除去能力と強い安定性はバイオ医薬分野に広く応用されているが,反応系に添加された微量ヌクレアーゼを効率的に除去することは重要な生産問題となっている。反応後のヌクレアーゼの迅速除去システムを確立するために,本研究では,STREP-TAG ラベル融合 NUCLEASE NUCLEASE(SNU)を構築した。融合蛋白質の触媒特性と除去効果を分析した。霊遺伝子の配列に従って,融合蛋白質STREP-TAG-SNUを設計し,融合蛋白質PLLP-OMPA-SNUを構築した。組換えプラスミドを大腸菌BL21に形質転換し,その発現を誘導した。STREP-IIの融合蛋白質を封入体として過剰発現させ,封入体の最適化条件を最適化することによって,高純度封入体を得た。融合蛋白質の封入効率は60%以上であった。高純度の融合蛋白質を,再生(DEAE)-アガロースゲル(()陰イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。融合蛋白質の精製効率は18.695MG/Lであった。結果は,融合蛋白質がDNAとRNAを効率的に分解することができ,最適温度は37°C,最適PHは8.0,比活性は1.53×105U/MGであることを示した。500MMOL/L以下の尿素は酵素活性にほとんど影響しなかった。しかし、50MMOL/L MGCL_2、2MMOL/Lのエチレンジアミン四酢酸(ETHYLENE ジアミンエージェント ACID,EDTA)よりも、活性に対して一定の抑制作用がある。MG(2+)とMN(2+)は,組換えヌクレアーゼの活性を促進することができ,ZN(2+),CU(2+),およびCA(2+)は,酵素活性に影響を及ぼさなかった。しかし,CO(2+),NI(2+)およびFE(2+)は,組換えヌクレアーゼの活性を促進しなかった。ストレプトアビジン(STREPTAVIDIN)-SEPHAROSE CL 6BによりSTREP-TAGIIタグを融合したヌクレアーゼの効率的な除去が可能であった。これらの結果は,STREP-TAGタグの融合蛋白質の組換え発現,封入体の1-再生システム,および除去システムの確立が,非特異的ヌクレアーゼの実用的応用のための基礎データを提供することを示した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

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遺伝子操作 , 微生物の生化学

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