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J-GLOBAL ID：201702241675880845   整理番号：17A0059007

エラープローンPCRを用いて,シクロデキストリンの可溶性発現を向上させた。【JST・京大機械翻訳】

Improving soluble expression of Geobacillus sp. B1 CGTase by errorprone PCR

著者 (6件)： Guo Yonghua (Soil and Fertilizer Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences) ,  Chen Jichen (Soil and Fertilizer Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences) ,  Jia Xianbo (Soil and Fertilizer Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences) ,  Chen Longjun (Soil and Fertilizer Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences) ,  Cai Haisong (Soil and Fertilizer Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences) ,  Lin Xinjian (Soil and Fertilizer Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences)
資料名： Weishengwu Xuebao  (Weishengwu Xuebao)
巻： 56  号： 10  ページ： 1551-1560  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2382A  ISSN： 0001-6209  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]本研究の目的は,熱 CHB CHB1のシクロデキストリン(遺伝子)遺伝子の方向性進化を研究し,細胞外酵素活性と可溶性発現の定量的改良のための変異をスクリーニングすることであった。【方法】PCR法を用いて,シクロデキストリン遺伝子をランダムに突然変異させ,酵素遺伝子突然変異ライブラリーを構築し,細胞外酵素活性と可溶性発現の定量的変異体をスクリーニングし,変異の誘導発現,精製,および部分的酵素特性を研究した。[結果]CGTASEの細胞外酵素活性と可溶性発現が定量的に増加した突然変異株DS-6とGS-9をスクリーニングすることにより、その細胞外Α-環化活性はそれぞれ元の酵素の1.72倍と2.18倍であり、可溶性発現量は1倍向上した。配列解析により,突然変異体GS-9には3つの塩基があることが示された。G2005A/A2037G/A2081G,その中に2つの塩基変異がアミノ酸の変化をもたらした。SWISS-MODELデータベースによるCGTASEの構造シミュレーションにより、2つの突然変異アミノ酸はそれぞれランダムコイルとΒ-ターン//間の回転角に位置することが明らかになった。酵素学的性質を測定した。突然変異CGTASEのΒ-環化比活性は元の酵素の2.44倍であり,総酵素活性は34%増加し,KM値は4.3G/Lから3.74G/Lに減少した。PH安定性は元の酵素よりも高かった。単一変異点突然変異は突然変異体GS-9の可溶性発現レベルと細胞外酵素活性の向上の重要な突然変異はG2005Aであることを証明した。[結論]本実験は以下のことを示した。BACILLUS 熱 CHB1のCGTASEの可溶性と可溶性発現は,PCRによって得られ,G2005A突然変異は,CGTASEの可溶性発現と細胞外酵素活性化に重要な役割を果たした。これはCGTASEの構造活性相関を認識し、さらにこの酵素分子を改造し、酵素の生産応用を拡大するために重要な意義がある。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 変異 ,  *可溶性 ,  酵素活性度 ,  PCR法 ,  点突然変異 ,  アミノ酸 ,  突然変異 ,  酵素 ,  指向性 ,  構造活性相関 ,  データベース ,  *シクロデキストリン ,  *溶解性
準シソーラス用語： 配列解析 ,  酵素遺伝子 ,  細胞外酵素活性度 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： thermophilic cyclodextrin glucosetransferase ,  soluble expression ,  directed evolution ,  errorprone PCR

分類 (6件)： 分子遺伝学一般  (EC02010J) ,  遺伝的変異  (EC01030Y) ,  遺伝子操作  (EC02050B) ,  バイオアッセイ  (EA03060N) ,  稲作  (FC03020C) ,  酵素生理  (EH02020J)

タイトルに関連する用語 (4件)： PCR ,  シクロデキストリン ,  可溶性 ,  発現