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J-GLOBAL ID：201702254560880601   整理番号：17A0669464

抗のBFGFモノクローナル抗体の可変領域遺伝子クローニングと一本鎖抗体の構築と発現【JST・京大機械翻訳】

Cloning of the variable region genes from hybridoma against bFGF and expression of single chain antibody fragments in E. coli HB2151

著者 (8件)： WANG Hong (Center of Antibody Engineering, Jinan University) ,  CHEN Dan (Center of Antibody Engineering, Jinan University) ,  DENG Ning (Center of Antibody Engineering, Jinan University) ,  XIANG Junjian (Center of Antibody Engineering, Jinan University) ,  JIN Yingjie (Center of Antibody Engineering, Jinan University) ,  HUANG Hongliang (Center of Antibody Engineering, Jinan University) ,  TANG Yong (Center of Antibody Engineering, Jinan University) ,  YANG Hongyu (Center of Antibody Engineering, Jinan University)
資料名： Xibao yu Fenzi Mianyixue Zazhi  (Xibao yu Fenzi Mianyixue Zazhi)
巻： 23  号： 12  ページ： 1150-1153  発行年： 2007年12月18日 
JST資料番号： C2523A  ISSN： 1007-8738  CODEN： XFMZFM  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的;分泌性塩基性線維芽細胞成長因子(BFGF)モノクローナル抗体(MAB)ハイブリドーマ細胞株B2F3から抗体可変領域(V)遺伝子をクローニングし,BFGF一本鎖抗体(SCFV)を構築し,可溶性発現を行った。方法;BFGF MABハイブリドーマ細胞株B2F3から全RNAを抽出し、RT-PCR法により抗体の重鎖可変領域遺伝子(V_H)と軽鎖の可変領域遺伝子(V_L)を増幅した。次に,重(GLY_4SER)_3をV_HとV_L遺伝子の間に挿入し,BFGF(GLY)PCR法によってBFGF SCFVを構築した。配列決定の正しいSCFV遺伝子を発現ベクターPCANTAB 5Eにクローニングし、電気菌株E.COLI HB2151を選択し、可溶性発現を行った。SDS-PAGEにより抗体の発現レベルを測定し、ELISAによりその抗原結合活性を同定した。【結果】;配列分析の結果,V_H遺伝子の全長は375塩基対であり,125アミノ酸をコードし,V_L遺伝子の全長は399塩基対で,133アミノ酸をコードし,両者はマウスの免疫グロブリン可変領域の遺伝子特性に一致した。4つのフレーム領域(FR)、3つの抗原相補性決定領域(CDR)及び抗体特徴的な2つのシステイン残基を含む。構築したSCFVの全長は789塩基対であり、263のアミノ酸をコードし、連結構造はV_H-リンカー-V_Lであった。SDS-PAGE分析により、SCFV遺伝子は大腸菌に可溶性発現し、発現産物は主にセファロースに位置し、発現産物のMRは27000であり、理論的期待値と一致することが分かった。間接ELISAの結果は,原核発現のSCFVがBFGFと特異的に結合することを示した。結論;BFGF MABの可変領域遺伝子のクローニングに成功し、BFGF SCFVを発現し、BFGF抗体のヒト化改造の研究に実験的基礎を築いた。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： アミノ酸 ,  抗原 ,  *モノクローナル抗体 ,  可溶性 ,  *抗体 ,  ヒト ,  *遺伝子クローニング ,  SDS-PAGE ,  大腸菌 ,  PCR法 ,  *遺伝子 ,  ELISA ,  RT-PCR法 ,  溶解性
準シソーラス用語： *一本鎖抗体 ,  *可変領域 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： bFGF ,  monoclonal antibody ,  variable regiongene ,  single chain antibody ,  expressions

分類 (2件)： 抗原・抗体・補体の生産と応用  (ED04030W) ,  遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (7件)： bFGF ,  モノクローナル抗体 ,  可変領域 ,  遺伝子クローニング ,  一本鎖抗体 ,  構築 ,  発現