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J-GLOBAL ID：201702261041298617   整理番号：17A0297545

ミトコンドリアシグナルペプチドは,グルコース調節蛋白質75-強化緑色蛍光蛋白質(GRP75-EGFP)融合蛋白質を,ミトコンドリアに位置させた。【JST・京大機械翻訳】

Mitochondrial signal peptide guides EGFP-GRP75 fusion proteins into mitochondria

著者 (4件)： Chen Hang (Department of Biochemistry,School of Medicine,Nankai University) ,  Niu Xiuran (Department of Biochemistry,School of Medicine,Nankai University) ,  Gao Aiai (Department of Biochemistry,School of Medicine,Nankai University) ,  Zhang Sihe (Department of Biochemistry,School of Medicine,Nankai University)
資料名： Xibao yu Fenzi Mianyixue Zazhi  (Xibao yu Fenzi Mianyixue Zazhi)
巻： 32  号： 10  ページ： 1311-1316  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2523A  ISSN： 1007-8738  CODEN： XFMZFM  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的:グルコース調節タンパク質75(GRP75)の異なるドメイン、異なる形式の突然変異体とミトコンドリアのシグナルペプチドの組換えタンパク質を構築し、細胞の位置決めを行う。方法:オーバーラップPCR法により、化のシグナルペプチド配列をそれぞれGRP75の異なるドメインの遺伝子と結合させた。部位特異的突然変異PCRを用いて,62と65のアミノ酸突然変異のリン酸化不,リン酸化活性化突然変異体,482アミノ酸突然変異の基質結合欠陥突然変異体と三座点突然変異体をそれぞれ増幅した。これらの組換え遺伝子をPEGFPC1真核生物発現プラスミドにクローニングし、制限酵素消化と配列決定によりそれぞれHELA細胞にトランスフェクションし、WESTERN BLOT法により組換えタンパク質の発現レベルを測定し、レーザー共焦点顕微鏡観察により組換え型質細胞の定位状況を比較した。結果:ミトコンドリアシグナルペプチドの融合あるいは欠失のGRP75ドメイン、リン酸化不活性化と活性化突然変異体、基質結合欠陥欠陥核発現プラスミドの構築に成功した。各組換えプラスミドのフラグメント挿入、部位変異、シグナルペプチド融合状況はいずれも設計目的に一致し、HELA細胞発現後の産物の相対分子質量の大きさはいずれも予想される。EGFPのC末端にシグナルペプチドを挿入することにより、下流融合したGRP75の全長タンパク質、ドメインの断片、突然変異体タンパク質の発現はHELA細胞のミトコンドリアに位置し、シグナルペプチドの欠損組換えタンパク質は主に細胞質と局部の核に分布している。結論:一連のGRP75再構築核発現プラスミドを構築し、EGFP融合シグナルペプチドは組み換えタンパク質のミトコンドリアにおける発現定位を誘導することができる。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *タンパク質 ,  不活性化 ,  プラスミド ,  トランスフェクション ,  リン酸化 ,  変異 ,  基質 ,  *シグナルペプチド ,  分子量 ,  突然変異 ,  *ミトコンドリア ,  真核生物 ,  PCR法 ,  *融合タンパク質 ,  アミノ酸

著者キーワード (4件)： GRP75 ,  mitochondrial targeting signal peptide ,  overlap extension PCR ,  subcellular localization

分類 (3件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子発現  (EC02040Q) ,  遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

タイトルに関連する用語 (6件)： ミトコンドリア ,  シグナルペプチド ,  グルコース調節 ,  蛋白質 ,  強化緑色蛍光蛋白質 ,  融合蛋白質