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J-GLOBAL ID：201702271970848389   整理番号：17A0677967

ヒト K5変異体の大腸菌における最適発現【JST・京大機械翻訳】

Optimal Expression and Activity Detection of Human Plasminogen Mutant Kringle 5 in E.coli

著者 (8件)： LI Chaoyang (State Key Laboratory of Ophthalmology, Zhongshan Ophthalmic Center, SUN Yat-sen University) ,  WEN Nan (Department of Biochemistry, Zhongshan Medical School, SUN Yat-sen University) ,  YANG Zhonghan (Department of Biochemistry, Zhongshan Medical School, SUN Yat-sen University) ,  CAI Weibin (Department of Biochemistry, Zhongshan Medical School, SUN Yat-sen University) ,  LI Mingyou (Guangzhou Qiyuan Biotech Co. Ltd) ,  LIU Zuguo (State Key Laboratory of Ophthalmology, Zhongshan Ophthalmic Center, SUN Yat-sen University) ,  GAO Guoquan (Department of Biochemistry, Zhongshan Medical School, SUN Yat-sen University) ,  YANG Xia (Department of Biochemistry, Zhongshan Medical School, SUN Yat-sen University)
資料名： Zhongshan Daxue Xuebao. Yixuekexueban  (Zhongshan Daxue Xuebao. Yixuekexueban)
巻： 29  号： 2  ページ： 221-225  発行年： 2008年 
JST資料番号： C2599A  ISSN： 1672-3554  CODEN： ZYXUEC  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]本研究の目的は,K5突然変異体(MK5)の原核細胞系における発現量を増加させることである。【方法】発現に影響するパラメータを調整した。抗生物質濃度,PN,A_(600)値,IPTG濃度,誘導時間,誘導温度,および他のパラメータを固定した。電気泳動分析により,MK5の原核生物系PET22B-BL21における最適発現条件を得た。ヒスチジン5蛋白質をアフィニティークロマトグラフィーにより精製し,MK5蛋白質をSDS-PAGEおよびウエスタンブロットにより同定した。ヒト網膜毛細血管内皮細胞(HRCEC)の増殖に及ぼすMK5の影響を,MTT法によって分析した。【結果】最適化された発現条件は以下の通りであった。最適培養温度は37°Cであった。最適抗生物質濃度は50ΜG/MLであった。最適PH値は7.0であり,A_(600)が0.9~1.0のとき,1.0MMOL/LのIPTGが最適誘導条件であり,37°Cで10時間誘導したとき,最適誘導時間であった。最適条件下で,MK5の精製蛋白質の収率は21MG/Lであった。収率は最適化前(15MG/L)より30%高かった。MK5は特異的にHRCECの増殖を阻害し,IC_(50)は40NMOL/Lであった。【結語】本研究は,MK5蛋白質発現の最適パラメータを決定した。生物活性を有する高純度、高発現量の組換えタンパク質を獲得し、工業化大規模発酵生産に基本的なパラメータを提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 原核生物 ,  ウェスタンブロット法 ,  抗生物質 ,  組換タンパク質 ,  最適化 ,  タンパク質 ,  *ヒト ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  *大腸菌 ,  生物活性 ,  最適条件 ,  SDS-PAGE ,  原核細胞
準シソーラス用語： 蛋白質発現 ,  誘導時間 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： human plasminogen kringle5 ,  deletion mutant ,  neovascularization ,  optimal expression

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  酵素一般  (EB09010D)

タイトルに関連する用語 (4件)： ヒト ,  変異体 ,  大腸菌 ,  発現