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J-GLOBAL ID：201702272702767918   整理番号：17A0106738

粒1Y162遺伝子の進化解析,発現および同定を行った。【JST・京大機械翻訳】

Analysis of Gene Evolution, Protein Expression and Identification of Echinococcus granulosus EgG1Y162

著者 (5件)： Tuerxun Zulipiye (Base to Foster a State Key Lab for Major Disease Research in Xinjiang,The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University) ,  Cao Chunbao (Base to Foster a State Key Lab for Major Disease Research in Xinjiang,The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University) ,  Wen Hao (Base to Foster a State Key Lab for Major Disease Research in Xinjiang,The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University) ,  Ding Jianbing (College of Preclinical Medicine,Xinjiang Medical University) ,  Yimiti Delixiati (Base to Foster a State Key Lab for Major Disease Research in Xinjiang,The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University)
資料名： Zhongguo Shengwu Gongcheng Zazhi  (Zhongguo Shengwu Gongcheng Zazhi)
巻： 36  号： 4  ページ： 78-87  発行年： 2016年 
JST資料番号： C3082A  ISSN： 1671-8135  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的;細胞のY1Y162遺伝子をクローニングし,同定し,その蛋白質発現と適応性進化を分析し,抗原性を同定した。方法;EMY162遺伝子の配列に従って,プライマー ,,, ,,成虫,および卵の4つの発育段階から,ゲノムDNAと全RNAを抽出し,MRNAは逆転写によってCDNAに変換した。PCR1Y162遺伝子を,ゲノムDNAとCDNAを鋳型としてPCRによって増幅した。PUCM-T/EGG1Y162組換えプラスミドを構築し,PCR,制限酵素消化及び配列決定により同定した。DNAMAN1Y162遺伝子の特性を,DNAMANソフトウェアとMEGA4ソフトウェアを用いて分析し,EGG1Y162核酸配列の進化ツリーを構築し,それらの相同性をさらに検討した。蛍光1Y162遺伝子の発現は,粒 ,,節 ,,成虫,および卵の4つの異なる発育段階において蛍光定量的PCRによって検出された。方向1Y162抗原遺伝子フラグメントを原核生物発現プラスミドPET-41Aにクローニングし,制限酵素消化とPCR同定により陽性クローンをスクリーニングし,配列決定した。IPTG1Y162-GST組換え蛋白質をIPTGによって誘導し,発現させ,SDS-PAGEおよびウエスタンブロットによって同定した。【結果】;粒1Y162遺伝子を,2つの異なる発育段階からクローン化し,そして,総BPの長さをもつ完全長CDNAをクローン化し,そして,長さ459BPのCDNAフラグメントを,CDNAからクローン化した。類似性比較により,EGG1Y162遺伝子の配列はEMY162と91%の類似性を示し,EGG1Y162のCDNAとEMY162の類似性は95%であった。さらに,EGG1Y162遺伝子配列は3つのエキソンと2つのイントロンから成り,エキソン1はそれぞれ1~70,1~1と1~1であった。物質1~16アミノ酸は構成1Y162シグナルペプチド配列を構成し、35~115アミノ酸は一つの大きなとタンパク質スプライセオソーム3を発現し、133~152位のアミノ酸はカルボキシル基端跨膜領域を構成する。配列決定の結果,EGG1Y162遺伝子の長さは360BPであり,120アミノ酸をコードすることが示された。蛍光定量的PCRにより,EGG1Y162が成虫,,,段階および卵の段階で異なる程度の発現をもつことを示した。しかし,EGG1Y162は,成虫において最も多く発現し,その相対的値は19.526%であり,それらの間には有意差があり(P<0.01),次に段階では相対%であったが,虫段階では1.6588%であった。構築したPET-41A/EGG1Y162原核発現プラスミドをIPTGで誘導した後、SDS-PAGE分析により、EGG1Y162-GST組換えタンパク質の発現が成功し、相対分子量が44KDAの場合に発現バンドがあることが分かった。ウエスタンブロット分析により,陽性の分子量は44KDAであり,EGG1Y162組換え蛋白質は,40日目の粒の血清と反応することが示された。包虫症患者の血清にも陽性反応がある。結論;EGG1Y162遺伝子のクローニングに成功し,配列1Y162のCDNAとEMY162のCDNAの間に高い類似性があり,遺伝子1Y162の遺伝子は新しい遺伝子であることが示された。EGG1Y162は成虫で最も多く発現した。EGG1Y162組換蛋白質の発現に成功し,EGG1Y162組換蛋白質は良好な抗原性を示した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *成虫 ,  アミノ酸 ,  ウェスタンブロット法 ,  蛍光 ,  血清 ,  アミノ酸配列 ,  クローン ,  類似性 ,  プラスミド ,  組換タンパク質 ,  ヌクレオチド配列 ,  DNA制限酵素 ,  SDS-PAGE ,  相同性 ,  分子量

著者キーワード (4件)： EgG1Y162 antigen ,  Phylogenetic tree ,  Fluorescence quantitative PCR ,  Prokaryotic expression

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

タイトルに関連する用語 (5件)： 遺伝子 ,  進化 ,  解析 ,  発現 ,  同定