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J-GLOBAL ID：201702273702977735   整理番号：17A0201346

相同組換えと逆転写PCRに基づいて,BRD7ブロモドメイン欠失突然変異体を構築した。【JST・京大機械翻訳】

Construction of bromodomain-deleted BRD7 mutation vector based on homologous recombination and reverse PCR amplification

著者 (6件)： Niu Weihong (Cancer Research Institute, Central South University) ,  Wang Xinye (Cancer Research Institute, Central South University) ,  Zhou Yao (Cancer Research Institute, Central South University) ,  Li Xiayu (Department of Gastroenterology, Third Xiangya Hospital, Central South University) ,  Li Guiyuan (Cancer Research Institute, Central South University) ,  Zhou Ming (Cancer Research Institute, Central South University)
資料名： Zhongnan Daxue Xuebao. Yi Xue Ban  (Zhongnan Daxue Xuebao. Yi Xue Ban)
巻： 41  号： 9  ページ： 885-890  発行年： 2016年 
JST資料番号： C3122A  ISSN： 1672-7347  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的;相同7蛋白質(BRD7)をコードする真核生物発現ベクターを,相同組換と逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって構築した。方法;逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)により,PIRES2-EGFP-3FLAG/ BRD7プラスミドをテンプレートとして構築し,高忠実度と長い伸長能力を利用した。BRD7の領域欠失突然変異体(PIRES2-EGFP-3FLAG/BRD7△BRD)の線形DNAフラグメントを逆転写により増幅し,大腸菌に変換し,大腸菌の相同組換修復能力を用いて自己環化した。しかし,PIRES2-EGFP-3FLAG/BRD7△BRDの組換え発現プラスミドを,酵素結合または他の処理によって得ることができず,配列決定およびウェスタンブロット法によって,この突然変異体の配列および蛋白質発現特性をさらに検証した。【結果】;制限酵素消化,配列決定およびウェスタンブロット法により,PIRES2-EGFP-3FLAG/BRD7△BRDの構築に成功したことが確認された。結論;PCRによる逆転写と相同組換え技術を用いて、PIRES2-EGFP-3FLAG/ BRD7△BRD突然変異体を簡便かつ迅速に構築でき、実験のコストが低く、プラスミドの濃度がベクターの相同組換え効率に影響することが分かった。この改良技術は遺伝子突然変異体の構築に広く応用できる。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ウェスタンブロット法 ,  線形性 ,  ベクター ,  プラスミド ,  *相同組換 ,  *RT-PCR法 ,  DNA制限酵素 ,  *逆転写 ,  真核生物 ,  *欠失突然変異
準シソーラス用語： 蛋白質発現 ,  組換蛋白質発現 ,  DNAフラグメント ,  EGFP ,  発現ベクター , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： reverse PCR ,  homologous recombination ,  bromodomain-containing protein 7 ,  bromodomain

分類 (1件)： 分子遺伝学一般  (EC02010J)

タイトルに関連する用語 (4件)： 相同組換え ,  逆転写PCR ,  ブロモドメイン ,  構築