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J-GLOBAL ID：201702276884668894   整理番号：17A0109853

ブタのウイルス性下痢症のための病金可視化チップ技術の実験条件の最適化研究と応用【JST・京大機械翻訳】

The Optimization and Application of Swine Diarrhea Virus Visual Microarray Based on Gold Labeled Silver Staining

著者 (9件)： Ma Rui (Porcine Disease Research Center and Microarray Laboratory, College of Animal Medical, Sichuan Agricultural University) ,  Huang Xiaobo (Porcine Disease Research Center and Microarray Laboratory, College of Animal Medical, Sichuan Agricultural University) ,  Yang Guolin (Porcine Disease Research Center and Microarray Laboratory, College of Animal Medical, Sichuan Agricultural University) ,  Hua Xiang (Porcine Disease Research Center and Microarray Laboratory, College of Animal Medical, Sichuan Agricultural University) ,  Zhao Yujia (Porcine Disease Research Center and Microarray Laboratory, College of Animal Medical, Sichuan Agricultural University) ,  Wen Xintian (Porcine Disease Research Center and Microarray Laboratory, College of Animal Medical, Sichuan Agricultural University) ,  Cao Sanjie (Porcine Disease Research Center and Microarray Laboratory, College of Animal Medical, Sichuan Agricultural University) ,  Wen Yiping (Porcine Disease Research Center and Microarray Laboratory, College of Animal Medical, Sichuan Agricultural University) ,  Wu Rui (Porcine Disease Research Center and Microarray Laboratory, College of Animal Medical, Sichuan Agricultural University)
資料名： Nongye Shengwu Jishu Xuebao  (Nongye Shengwu Jishu Xuebao)
巻： 24  号： 8  ページ： 1233-1242  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2715A  ISSN： 1674-7968  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 遺伝子チップの標準化はその特異的高感度検出の基本的保障であり、本研究では、金標銀染の可視化遺伝子チップに対して、中点様緩衝液の使用、スポット回数、交雑温度、交雑時間、コロイド化時間及び銀染色時間についてそれぞれ最適化実験を行った。金標銀染の可視化全体遺伝子チップのハイブリダイゼーション信号に対する影響を分析した。ブタ流行性下痢ウイルス(PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA VIRUS,PEDV)のSとM遺伝子をそれぞれ選択した。ブタ伝染性胃腸炎ウイルス(TRANSMISSIBLE GASTROENTERITIS OF SWINE VIRUS, TGEV)のNとS遺伝子。A型型ウイルス(GROUP A PORCINE BRV, GAR)のVP7とNSP4遺伝子はプライマーを設計した。5’末端に15個のT塩基を修飾した60-MERオリゴヌクレオチドプローブを設計し,それぞれ1:1混合緩衝液と2つの方法により,1回,2回,3回のマイクロアレイにより遺伝子チップを作製した。非対称PCRを用いて、実験室で保存された3種類の下痢ウイルスの陽性プラスミドをビオチンで標識し、それぞれ40、45、50と55°Cで遺伝子チップと交雑し、30、60、90と120MINにした。ビオチン-ストレプトアビジンの特異的リンカーを用いて,それぞれ10,20,30,40,50および60倍のストレプトアビジンを修飾した金ナノ粒子を反応系に導入し,異なる銀イオンで染色した後,直接外見実験結果を得た。最適化した標準化可視化チップとRT-PCRを同時に173個の臨床検査室に対して検査を行い、チップの臨床応用を評価する。結果は,プローブとスポット緩衝液の1:1の混合物を用いて,1回の噴様によって調製した遺伝子チップを,50°Cで90分間ハイブリダイゼーションした後に,4ΜG/MLのストレプトアビジンで修飾した金ナノ粒子と結合して,12~14分の銀染色を行った。10回の反復実験により,金標銀染可視化遺伝子チップの最適化のための最適条件を決定することができた。RT-PCRの結果は,RT-PCRの結果と一致した。本研究はウイルス性下痢の可視化マイクロチップの最適反応条件を確定し、この技術の臨床応用標準化の研究に基礎を築いた。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 最適条件 ,  標準化 ,  ストレプトアビジン ,  遺伝子 ,  *下痢 ,  高感度 ,  *最適化 ,  RT-PCR法 ,  プラスミド ,  交雑 ,  *金 ,  カルボン酸 ,  窒素複素環化合物 ,  ビタミンB群 ,  ウレア化合物 ,  硫黄複素環化合物
準シソーラス用語： マイクロチップ ,  金ナノ粒子 ,  ジーンチップ , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： Porcine epidemic diarrhea virus ,  Microarray ,  Gold label silver stain ,  Optimal conditions

分類 (2件)： 豚  (FD02040U) ,  ウイルスによる動物の伝染病  (FE02024R)

物質索引 (1件)： ビオチン

タイトルに関連する用語 (8件)： ブタ ,  ウイルス性下痢症 ,  病 ,  可視化 ,  実験条件 ,  最適化 ,  研究 ,  応用