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J-GLOBAL ID：201702278565261077   整理番号：17A0259273

バッタ マイクロ PCRのPCR検出法の確立と応用【JST・京大機械翻訳】

Establishment and Application of Nested-PCR Method for Detection of Paranosema locustae

著者 (6件)： Hu Hongxia (College of Life Sciences, Xinjiang Normal University/Key Laboratory of Conservation Biology and Management for Xinjiang Special Species/International Research Center for Cross-Border Pest Management in Central Asia) ,  Ma Yuxuan (College of Life Sciences, Xinjiang Normal University/Key Laboratory of Conservation Biology and Management for Xinjiang Special Species/International Research Center for Cross-Border Pest Management in Central Asia) ,  Wang Yanhong (Xinjiang Hami Locust and Rat Plagues Forecast Station) ,  Lin Jun (The Locust and Rat Plagues Forecast Center of Xinjiang Uygur Autonomous Region) ,  Li Zhanwu (Xinjiang Hami Locust and Rat Plagues Forecast Station) ,  Ji Rong (College of Life Sciences, Xinjiang Normal University/Key Laboratory of Conservation Biology and Management for Xinjiang Special Species/International Research Center for Cross-Border Pest Management in Central Asia)
資料名： Zhongguo Nongye Kexue  (Zhongguo Nongye Kexue)
巻： 49  号： 21  ページ： 4239-4245  発行年： 2016年 
JST資料番号： W1459A  ISSN： 0578-1752  CODEN： CKNYAR  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]本研究の目的は,胞子(予防 LOCUSTAE)を検出するための高感度で迅速な方法を確立することであり,胞子によるバッタの防除のための技術的支援を提供することである。[方法]GENBANKデータベースから公表された保存性の高い胞子小サブユニットのRNAを標的遺伝子とし、PRIMERSELECTソフトウェアを用いて、2対の特異的なネステッドPCRプライマーPを設計した。L。-FL/P.L。-R1とP。L。-F2/P。L。-R2,微Bao子虫液を0.2MOL-L(-1)KOHで処理した発芽液をテンプレートとしてPCR増幅を行い,Pを確立した。Z.-FL/P.L。-R1は外側プライマー,Pであった。L。-F2/P。L。-R2は内側プライマーのネステッドPCRであり,拡増産はそれぞれ298と242BPであった。プライマー濃度,アニーリング温度およびサイクル数を最適化し,ネステッド法を確立し,勾配希釈法による胞子 虫液の感受性試験を行い,ハミルトニアン地域からのバリコンサンプルを検出した。同時に,抽出した胞子を従来の顕微鏡で検出し,2つの方法の感度を比較した。【結果】バッタ 胞子の胞子の迅速PCR検出法を確立し,最適化したPCR反応系は20ΜLであった。BUFFER(10×)2.0ΜL,DNTP(10MMOL・L(-1))0.3ΜL,TAQ DNA(250U)0.3ΜLであった。上清と下流のプライマー(10ΜMOL・L(-1))の各0.3ΜL、マイクロ胞子虫の発芽液(第2ラウンドは第1ラウンド産物10×希釈液をテンプレートとする)1ΜL、水を20ΜLに補充した。PCR反応プログラムは以下の通りであった。94°C,3MIN;94°Cで30S変性し,1回目の60°Cで焼鈍し(第2回62°Cで30分間アニール),72°Cで20S延伸し,35サイクルを行った。72°Cで10分間延伸し,10°Cで保存した。感度試験により,検出された微胞子数は12.2個の胞子/ΜL(DNA量1.071.07(-1))に達することができることを示した。確立したネステッドPCR法を用いて、新疆のハミルトニアン地区から採取したバリコンの240頭のサンプルに対して胞子検査を行い、検出結果は23.3%の陽性を示したが、顕微鏡検査の結果は僅か3.8%であった。[結論]本研究により確立したPCR法は,バッタの感染を迅速かつ特異的に検出することができ,これらの結果は,バッタ マイクロ マイクロの研究における技術的支援を提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ハミルトニアン ,  高感度 ,  焼なまし ,  最適化 ,  *バッタ類 ,  可変コンデンサ ,  発芽 ,  延伸 ,  希釈 ,  *PCR法 ,  データベース ,  DNA【核酸】 ,  感受性試験 ,  胞子
準シソーラス用語： nested PCR法 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (3件)： Paranosema locustae ,  nested polymerase chain reaction ,  detection

分類 (1件)： 微生物検査法  (EG02020G)

タイトルに関連する用語 (4件)： バッタ ,  PCR ,  PCR検出 ,  応用