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J-GLOBAL ID：201702279151050087   整理番号：17A0157312

GRP78組換え発現アデノウイルスの構築とHEPG2細胞の発現とその関連機能の研究【JST・京大機械翻訳】

Construction and expression of recombinant GRP78-expressed adenovirus and GRP78 expression in HepG2

著者 (5件)： Wu Shuang (Department of Laboratory,Chongqing Medical University) ,  Zhang Xiang (Department of Laboratory,Chongqing Medical University) ,  Wei Jie (Department of Laboratory,Chongqing Medical University) ,  Wang Deqiang (Key Laboratory of Molecular Biology on Infectious Diseases,Ministry of Education,Chongqing Medical University) ,  Luo Miao (Department of Clinical Laboratory,People’s Hospital of Yubei District of Chongqing)
資料名： Chongqing Yi Ke Daxue Xuebao  (Chongqing Yi Ke Daxue Xuebao)
巻： 41  号： 4  ページ： 384-388  発行年： 2016年 
JST資料番号： C3127A  ISSN： 0253-3626  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的;【目的】ブドウ糖蛋白質78(GRP78)の組換え発現プラスミドを構築し,GRP78を発現させ,HEPG2細胞に感染させることによって,GRP78を発現する細胞モデルを確立する。同時に,HEPG2細胞の増殖能力に及ぼすGRP78の影響を研究した。方法;シャトルプラスミドPADTRACK-TO4を構築するためにアデノウイルスシャトルプラスミドPADTRACK-TO4を使用して,シャトルプラスミドPADTRACK-TO4-GRP78を構築し,遺伝子配列決定によって確認した。ベクターをPMEI I制限酵素により線形化し,ADEASY-BJ5183細胞と相同的に再結合した。組換えアデノウイルスベクターを,制限酵素消化によって線形化した後に,HEK293細胞に形質移入した。増強緑色蛍光蛋白(ENHANCE GREEN FLUORESCENT PROTEIN,EGFP)の発現により組換えアデノウイルスの包装状況を判断した。GRP78組換え発現アデノウイルスを,遠心分離と低温切断によって抽出した。ヒト肝癌HEPG2細胞を標的としてウイルス感染を行った。GRP78の発現をQRT-PCRによって検出し,GRP78蛋白質の発現をウエスタンブロットによって検出した。最後にHEPG2細胞を感染させ、MTS比色法により組換え発現GRP78アデノウイルスの細胞増殖への影響を測定した。【結果】;配列決定により、PADTRACK-TO4-GRP78の構築に成功し、制限酵素消化により組換えアデノウイルスベクターPAD-GRP78の構築に成功したことが証明された。PAD-GRP78をHEK293細胞に封入し,GPF蛍光検出結果はウイルスパッケージングに成功したことを示した。肝細胞癌HEPG2細胞におけるGRP78遺伝子の過剰発現は,PAD-GRP78によって検出され,GRP78蛋白質の発現はウエスタンブロット法によって検出された。MTSアッセイの結果は,GRP78の組換え発現がHEPG2肝癌細胞の増殖を促進することを示した。結論;GRP78の組換え発現ベクターを首尾よく構築し,構築したアデノウイルスベクターはHEPG2細胞においてGRP78蛋白質を発現させ,感染させることができることを確認した。組換え発現GRP78アデノウイルスは肝癌細胞の増殖を促進することが証明された。それはGRP78の機能をさらに研究するための基礎を提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ウェスタンブロット法 ,  ヒト ,  HEK293細胞 ,  プラスミド ,  肝細胞癌 ,  肝臓腫瘍 ,  トランスフェクション ,  ベクター ,  細胞増殖 ,  蛍光 ,  DNA制限酵素 ,  *アデノウイルス科
準シソーラス用語： 過剰発現 ,  *組換蛋白質発現 ,  *GRP78 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： adenovirus ,  glucose regulated protein 78(GRP78) ,  HepG2 cell ,  MTS

分類 (2件)： 基礎治療学  (GC03012A) ,  分子遺伝学一般  (EC02010J)

タイトルに関連する用語 (7件)： GRP78 ,  組換え発現 ,  アデノウイルス ,  構築 ,  HepG2細胞 ,  発現 ,  研究