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J-GLOBAL ID：201702286297261450   整理番号：17A0075295

GATEWAY技術はヒト人レンチウイルス発現ベクターおよびヒトメラノーマA375細胞株の構築に成功した。【JST・京大機械翻訳】

Construction and Identification of RhoD Protein Overexpressing A375 Cell Lines Via Lentiviral Vectors

著者 (8件)： Wen Sijian (Department of Pathology, Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College) ,  Ni Nana (Jiangsu Key Laboratory of Molecular Biology for Skin Diseases and STIs) ,  Zhou Xiaowei (Jiangsu Key Laboratory of Molecular Biology for Skin Diseases and STIs) ,  Wu Qiong (Department of Pathology, Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College) ,  Wang Xiaopo (Department of Pathology, Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College) ,  Song Hao (Department of Pathology, Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College) ,  Zhang Wei (Department of Pathology, Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College) ,  Sun Jianfang (Department of Pathology, Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College)
資料名： Zhongguo Pifu Xingbing Xue Zazhi  (Zhongguo Pifu Xingbing Xue Zazhi)
巻： 30  号： 10  ページ： 998-1002  発行年： 2016年 
JST資料番号： C3078A  ISSN： 1001-7089  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的:ヒトRHOD遺伝子のレンチウイルスベクターを構築し、レンチウイルスパッケージングと同定を行い、メラノーマ細胞A375にトランスフェクトし、RHODタンパク質を過剰発現させ、後続のRHODのメラノーマにおける作用を研究するために基礎を築く。【方法】強化緑色蛍光蛋白質EGFPを含むRHODレンチウイルスベクターを構築し,PCRおよび遺伝子配列決定によって同定した後,補助-SL3ベクターに挿入した。PLV/ HELPER-SI4とPLV/HELPER-SL5の混合物をリポソーム法により調製し,293FT細胞にレンチウイルスパッケージングを行い,レンチウイルス粒子を生成した。定量的PCR法によりウイルス力価を測定した。パッケージングしたレンチウイルスは腫A375細胞にトランスフェクションし、蛍光顕微鏡下で蛍光発現状況を観察し、フローサイトメトリーでトランスフェクション効率を測定した。実験はA375(未処理対照群)、A375-EGFP(標的遺伝子を含まない空白ウイルス対照群)とA375-RHOD(RHOD遺伝子を含むウイルス群)の3群に分けた。A375-RHOD細胞におけるRHODの過剰発現を,リアルタイム蛍光定量的PCR(QPCR)および免疫蛍光法(WB)によって確認した。結果:PCRと遺伝子配列決定により、レンチウイルス発現ベクターPLV[ EXP]-EGFP/NEO-CMV>HRHODの構築に成功したことが確認された。プラスミドを293FT細胞に形質移入し,高力価のレンチウイルスを調製し,ウイルス力価は(5.13±2)×108//MLであった。A375細胞にトランスフェクションした後,緑色蛍光発現が観察され,トランスフェクション効率は80%以上であった。A375-RHOD群のRHOD MRNAおよび蛋白質レベルはA375-EGFP群およびA375群より有意に高かった。結論:RHODレンチウイルス発現ベクターの構築に成功し、高効率の感染力を持つレンチウイルス粒子をパッケージングし、腫A375細胞にトランスフェクションすることに成功し、RHODの黒色腫における作用をさらに研究するために実験的基礎を提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *レンチウイルス ,  蛍光抗体法 ,  蛍光 ,  *ベクター ,  *黒色腫 ,  プラスミド ,  フローサイトメトリー ,  リポソーム ,  *ウイルス ,  トランスフェクション ,  *ヒト ,  蛍光顕微鏡
準シソーラス用語： EGFP ,  過剰発現 ,  *A375細胞 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (6件)： RhoD gene ,  Lentiviral ,  Vector ,  Gateway technology ,  Over-expression ,  A375

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  ウイルスの生化学  (EG04030F)

タイトルに関連する用語 (8件)： ヒト ,  レンチウイルス ,  発現ベクター ,  メラノーマ ,  A375細胞 ,  株 ,  構築 ,  成功