RHGH-FC工学細胞の構築とスクリーニング【JST・京大機械翻訳】

Yu Lu; Liu Yulin; Shen Zhaoxing; Liu Han; Gong Shiqing; Wang Ying; Lv Xiaoyu; Wang Shiqi; Zhang Hong; Liu Jinghui

文献

J-GLOBAL ID：201702290972976636 整理番号：17A0173374

RHGH-FC工学細胞の構築とスクリーニング【JST・京大機械翻訳】

Construction and screening of rhGH-Fc engineering cells

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巻： 29 号： 10 ページ： 1021-1026 発行年： 2016年
JST資料番号： C3083A ISSN： 1004-5503 CODEN： ZSZZAP 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：中国語 (ZH)

目的:長い半減期を持つ長時間組換えヒト成長ホルモン(RECOMBINANT HUMAN GROWTH HORMONE,RHGH)を開発し、高発現のRHGH-FC免疫融合タンパク質を発現する細胞株を構築し選別する。方法:HGH遺伝子と特異的点突然変異後のヒトIGG4 FCセグメントをフレキシブルなリンカーで連結し、GS二重発現ベクターにクローニングし、二回の制限酵素消化とシークエンシング分析を行った後、正確なプラスミドをCHO-K1細胞に安定にトランスフェクトした。メチオニン(SULPHOXIMINE SULPHOXIMINE,MSX)の濃度を徐々に高めることにより、ELISA法で高発現の細胞株を選別した。標的蛋白質をアフィニティークロマトグラフィーによって精製し,SDS-PAGE,HPLC,および等電点電気泳動によって分析した。大鼠去の生物学的活性を大鼠去法により測定し,本課題で開発した長期間GHと他の一般GHの半減期を比較した。【結果】組換えプラスミドPHGH-FC-1は,2つの制限酵素消化と配列決定によって確認した。高発現のRHGH-FC融合蛋白質のスクリーニングに成功し,発現量は1G/Lに達した。精製蛋白質の相対分子量と等電点は理論値と一致し,純度は95%以上であった。経大鼠去の下垂体内活性測定は,その比活性が1.1IU/MGであり,ラットの体重増加により,その生物半減期が通常のRHGHより高いことを示した。結論:高発現長時間のRHGHの高発現のスクリーニングに成功し、今後の長時間RHGHの開発に基礎を築いた。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

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遺伝子発現

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