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J-GLOBAL ID：201702291472159009   整理番号：17A0677742

ヒトF1F0-ATPシンターゼΒサブユニットの原核発現,精製および抗体調製【JST・京大機械翻訳】

Prokaryotic expression, purification, and polyclonal antibody generation of β subunit of human F1F0-ATP synthase

著者 (7件)： YU Lili (Department of Pharmacy;Shanghai Jiaotong University) ,  ZHANG Yuanjun (Human Antibodomics(Shanghai)Inc) ,  ZHANG Xia (Department of Pharmacy;Shanghai Jiaotong University) ,  WANG Yibo (Department of Comprehensive Treatment;Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital;Second Military Medical University) ,  LIN Jianbo (Department of Comprehensive Treatment;Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital;Second Military Medical University) ,  NI Jian (Human Antibodomics(Shanghai)Inc) ,  PENG Yan (Human Antibodomics(Shanghai)Inc)
資料名： Xibao yu Fenzi Mianyixue Zazhi  (Xibao yu Fenzi Mianyixue Zazhi)
巻： 24  号： 3  ページ： 253-255,259  発行年： 2008年 
JST資料番号： C2523A  ISSN： 1007-8738  CODEN： XFMZFM  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的;ヒトF1F0-ATPシンターゼΒサブユニット(HATPSB5B)を原核生物発現,精製し,ポリクローナル抗体を調製した。方法;ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)の全RNAを鋳型とし、RT-PCRによりHATPSB5B成熟ペプチドコード配列を増幅し、原核生物発現ベクターPET28A(+)をクローニングし、大腸菌E.COLI BL21(DE3)に導入し、発現を誘導した。発現産物をNI(2+)キレートで精製し,精製産物を透析により精製し,SDS-PAGEとウエスタンブロットにより同定した。ポリクローナル抗体を調製するために,ウサギを免疫化した。ポリクローナル抗体の力価は間接ELISAによって検出され,そして,特異性と抗原結合性はウエスタンブロット法と細胞免疫蛍光法によって分析された。【結果】;配列解析により,HATPSB5B成熟ペプチド配列が得られ,SDS-PAGEにより同定され,相対分子量(M_R)は約55であり,理論値と一致した。組換えHATPSB5B(RECOMBINANT5B, 5B)の発現は,総蛋白質の36.8%を占め,精製産物の純度は98.3%であった。精製産物の純度は%%に達した。ポリクローナル抗体の力価は1:640であり,HUVEC中の天然抗原を特異的に認識することができた。結論;原核生物発現のHATPSB5Bは良好な免疫原性を持ち、その免疫ウサギの後に獲得した抗抗は特異性と特異性があり、HATPSB5Bの原核の高効率発現とその抗体の調製はHATPSB5Bの機能を更に研究するために実験の基礎を築いた。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ELISA ,  *抗体 ,  SDS-PAGE ,  *ヒト ,  ウェスタンブロット法 ,  RT-PCR法 ,  *合成酵素 ,  抗原 ,  大腸菌 ,  ポリクローナル抗体 ,  アミノ酸配列 ,  原核生物 ,  *サブユニット
準シソーラス用語： 特異性 ,  原核生物発現 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： hATP5B ,  rhATP5B ,  prokaryotic expression ,  polyclonal antibody

分類 (5件)： 蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N) ,  遺伝子操作  (EC02050B) ,  抗原・抗体・補体の生産と応用  (ED04030W) ,  酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

タイトルに関連する用語 (6件)： ヒト ,  βサブユニット ,  発現 ,  精製 ,  抗体 ,  調製