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J-GLOBAL ID：201602236511927808   整理番号：16A1256411

コレラ転写制御因子因子 C末端ドメインの原核発現と精製結晶【JST・京大機械翻訳】

Prokaryotic expression of the AphB gene of Vibrio cholerae, purification of AphB protein, and crystallization of its C-terminal

著者 (5件)： Su Meng (Chengde Medical University) ,  Wang Hui (Nanjing Agricultural University) ,  Zhong Zengtao (Nanjing Agricultural University) ,  Du Luanying (Chengde Medical University) ,  Gao Yanxia (Chengde Medical University)
資料名： Zhongguo Bingyuan Shengwu Xue Zazhi  (Zhongguo Bingyuan Shengwu Xue Zazhi)
巻： 11  号： 7  ページ： 620-624  発行年： 2016年 
JST資料番号： C3057A  ISSN： 1673-5234  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】APHBは,コレラ遺伝子の発現調節ネットワークにおける重要な転写制御因子であり,毒性遺伝子の発現を活性化することができ,APHBのC末端ドメインの結晶構造を得ることができる。これらの結果は,病原性調節ネットワークに及ぼすそれらの影響を研究するための基礎を提供する。【方法】コレラのC末端ドメインを対象として,標的遺伝子を発現ベクターPET-32A(+)にクローン化し,組換えプラスミドを大腸菌に効率的に発現させた。次に,NI(2+)イオン交換クロマトグラフィー,陽イオン交換クロマトグラフィー,およびGF75ゲルろ過クロマトグラフィーによって精製した。5,10,20,および30MG/MLの標的蛋白質を選択し,蛋白質結晶を滴法によって調製し,結晶化条件をスクリーニングした。晶の結晶化条件に基づいて,蛋白質と池液の混合比,結晶化剤の組成,環境温度などを変えることにより結晶化条件の最適化を行った。【結果】標的遺伝子を含む組換えプラスミドは,大腸菌において可溶性標的蛋白質を効率的に発現した。3種類のタンパク質の精製方法を用いて、精製を行い、比較的に高い純度の目的タンパク質を得た。結晶化条件を最適化し,最適結晶化条件を得た。蛋白質濃度は30MG/MLであった。池液の成分は0.1MOL/L BIS-TRIS,2.0MOL/L AMMONIUM SULFATE,PH5.0,18°Cで24時間培養した。最適化した結晶化条件で結晶化を行い,2.1Aの分解能を有する蛋白質結晶を得た。結論:原核発現と最適化された結晶化条件により、コレラ菌APHBのC末端ドメインのタンパク質結晶が得られ、得られたデータはタンパク質の空間構造解析に重要な根拠を提供し、タンパク質C末端ドメインと補助用いたの結合機能の研究に基礎を築いた。Data from the ScienceChina, LCAS.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *結晶 ,  立体構造 ,  可溶性 ,  プラスミド ,  *コレラ ,  ゲル浸透クロマトグラフィー ,  純度 ,  結晶構造 ,  結晶化 ,  イオン交換クロマトグラフィー ,  病原性 ,  最適化 ,  クローン ,  溶解性
準シソーラス用語： *C末端ドメイン ,  *転写調節因子 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： AphB ,  expression ,  purification ,  crystallization

分類 (4件)： 吸着,イオン交換  (XD02060I) ,  遺伝子発現  (EC02040Q) ,  抗原・抗体・補体の生産と応用  (ED04030W) ,  ウイルス学一般  (EG04010J)

タイトルに関連する用語 (7件)： コレラ ,  転写制御因子 ,  因子 ,  C末端ドメイン ,  発現 ,  精製 ,  結晶