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J-GLOBAL ID:201602281880253790   整理番号:16A0988731

超発現蛋白質STING(ブタ細胞株の確立とその古典的ブタコレラウイルス増殖への影響【JST・京大機械翻訳】

Establishment of swine stimulator of interferon gene cell line and its influences on CSFV replication
著者 (11件):
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巻: 46  号:ページ: 315-320  発行年: 2016年 
JST資料番号: C3087A  ISSN: 1673-4696  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: 中国 (CHN)  言語: 中国語 (ZH)
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ブタインターフェロン発現を構築するためには因子(STING)の真核細胞発現ベクターPEGFP(-STING)を刺激し,さらに細胞トランスフェクションとサブクローンをスクリーニングするための方法を用いて超発現蛋白質STINGのブタ臍帯静脈血管内皮細胞(SUVEC)細胞株を確立した。STING遺伝子をRT-PCRにより増幅し,発現STINGの真核細胞発現ベクターPEGFP-STING,リポフェクタミン2000によって媒介するトランスフェクションからブタ不死化血管内皮細胞(SUVECS)における発現を構築する。トランスフェクションの基礎の上で添加して1 500 G/ML G418耐性をスクリーニング,安定発現蛋白質STINGの細胞クローンを獲得し,さらにSTINGタンパク質の細胞内局在を,蛍光共焦点顕微鏡を用いて観察し,行った。STING安定発現タンパク質を確立しSUVECの細胞株。この基礎の上で,古典的ブタコレラウイルス(CSFV)感染48時間後,REAL-TIMEによりPCR法により安定発現ブタのSTING蛋白質のブタコレラウイルスの複製への影響を調べた。PCR、酵素消化とシークエンシングの結果は明らかに,ブタSTING遺伝子を正確にベクターPEGFP-C1における,遺伝子配列とGENBANKの完全一致を挿入した増幅に成功した。蛋白質STINGは成功したSUVECS細胞にトランスフェクトした後,宿主細胞内で発現され,また細胞質において主に発現された。G418抵抗性発現蛋白質STINGの細胞株をスクリーニングし,RT-PCRとウェスタンブロットを経て-BLOT検出蛋白質STINGがSUVECの細胞において転写と発現を安定化するが,SUVECの細胞の小胞体上に局在していることを示した。REAL-TIME PCR検出の結果,STING蛋白質の超発現CSFVの複製を促進する。本研究ではブタSTING蛋白質の真核細胞発現ベクターを構築することによりSTING蛋白質をSUVECの細胞中の超発現を実現する,安定して発現するタンパク質であるSTINGを確立したSUVECの細胞株。Data from the ScienceChina, LCAS.【JST・京大機械翻訳】
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分類 (1件):
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遺伝子操作 

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