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J-GLOBAL ID：201702219322528052   整理番号：17A0157000

大腸菌における高分子量ニトリルヒドラターゼの発現戦略と組換え菌の細胞触媒【JST・京大機械翻訳】

Strategy of high molecular mass nitrile hydratase expression in Escherichia coli and the whole-cell catalysis by the recombinant strains

著者 (3件)： Zhang Xiaohuan (Key Laboratory of Industrial Biotechnology (Ministry of Education), School of Biotechnology, Jiangnan University) ,  Cui Wenjing (Key Laboratory of Industrial Biotechnology (Ministry of Education), School of Biotechnology, Jiangnan University) ,  Zhou Zhemin (Key Laboratory of Industrial Biotechnology (Ministry of Education), School of Biotechnology, Jiangnan University)
資料名： Weishengwuxue Tongbao  (Weishengwuxue Tongbao)
巻： 43  号： 10  ページ： 2121-2128  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2731A  ISSN： 0253-2654  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】ESCHERICHIA COLI BL21(DE3)における赤 RHODOCHROUS J1由来の高分子量ニトリルヒドラターゼH-NHASEの過剰発現を達成し,菌体総活性を向上させる。菌体の発酵サイクルを短縮し、生産効率を向上させる。【方法】H-NHASEにおけるΑサブユニットをコードする遺伝子NHHAと調節遺伝子の上流のリボソーム結合部位(SHINE-DALGARNO SEQUENCE,SD)を翻訳開始の強度が高い異種のSDに置換した。同時に、各サブユニット間の間隔配列の長さを最適化し、大腸菌コドンバイアスにより目的遺伝子を最適化する。Eを通過する。大腸菌組換え発現系は,最適化されたニトリルヒドラターゼ遺伝子を過剰発現させた。イオン交換クロマトグラフィーを用いてH-NHASEを精製し,ゲルろ過クロマトグラフィーにより組換酵素の相対分子量を決定した。全細胞触媒条件を最適化し,基質供給の細胞触媒プロセスを確立し,ニコチンアミドの生産プロセスをシミュレーションした。【結果】H-NHASEはEであった。大腸菌で過剰発現が達成された。組換蛋白質の酵素活性は85.5±4.3U/MG,純Mei比活は234.0±11.7U/MG,H-NHASEの相対分子量は504.5±9.8KDであった。細胞の最適PHは7.5,最適温度は25°C,基質濃度は400MMOL/Lであった。これらの条件下で,組換酵素の酵素活性は256.0±10.4U/MLであり,最終的生成物の変換率は99.9%であった。[結論]組換えH-NHASEは大腸菌細胞の成長が速く、発酵周期が短く、この組換え菌を用いて細胞の触媒作用を行うことは、アミド類の生産効率を向上させ、潜在的な工業価値がある。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *高分子量 ,  最適化 ,  組換タンパク質 ,  イオン交換クロマトグラフィー ,  *分子量 ,  酵素活性度 ,  ゲル浸透クロマトグラフィー ,  基質 ,  *大腸菌
準シソーラス用語： 触媒作用 ,  最適温度 ,  組換酵素 ,  生産効率 ,  過剰発現 ,  *ニトリルヒドラターゼ , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (6件)： High molecular mass nitrile hydratase ,  Codon optimization ,  SD sequence ,  Intergenic region ,  Recombinant expression ,  Whole-cell catalysis

分類 (4件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  微生物酵素の生産  (FK03030L) ,  微生物の生化学  (EG03020N) ,  微生物,組織・細胞培養による物質生産一般  (FK03010P)

タイトルに関連する用語 (9件)： 大腸菌 ,  高分子量 ,  ニトリルヒドラターゼ ,  発現 ,  戦略 ,  組換え ,  菌 ,  細胞 ,  触媒