抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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目的:腫瘍壊死因子受容体関連蛋白質1(TRAPL)がラットの低酸素心筋細胞に対する保護作用の機序を検討する。方法:1~3D齢のSDラットを選び、心筋細胞を分離培養し、以下の実験に用いた。(1)細胞を採取し、ランダムな表法(グループ分け方法で同じ)によってTRAP1グループと対照グループに分け、細胞の総タンパクを抽出した。TRAP1群の総蛋白はマウスのTRAP1モノクローナル抗体を添加し、対照群の細胞総蛋白はマウス由来の同型のIGGを添加し、免疫共沈法とタンパク質スペクトル分析でTRAP1の作用するタンパク(2)細胞を,対照群,正常酸素+TRAP1干渉群,正常酸素+TRAP1干渉群,正常酸素+TRAP1過剰発現群,正常酸素+TRAP1過剰発現群,各群1群に分けた。正常対照群の細胞は通常の培養を行い,4つの群にはTRAP1 RNA干渉ベクター,TRAP1 RNA干渉アデノウイルスベクター,TRAP1過剰発現ベクター,TRAP1過剰発現アデノウイルスベクターをそれぞれ加えた。対照群,低酸素症対照群,低酸素+TRAP1干渉群,低酸素+TRAP1干渉群,低酸素+TRAP1過剰発現群,低酸素+TRAP1過剰発現群,低酸素+TRAP1過剰発現各低酸素群の細胞は,酸素欠乏の6時間後に低酸素症に対応した。リアルタイム蛍光定量的RT-PCRを用いて,各群におけるチトクロームCオキシダーゼII(COX)のMRNA発現を検出した。本実験は3回繰り返した.(3)細胞を,対照群,低酸素症対照群,低酸素+TRAP1過剰発現群,低酸素+TRAP1過剰発現群,低酸素+TRAP1過剰発現+COX II干渉群,低酸素+TRAP1過剰4つの群の細胞は,2つの群に分けられた:(1)COX II RNA干渉ウイルスベクターとCOX II RNA干渉ベクターをそれぞれトランスフェクションした後に,TRAP1過剰発現アデノウイルスベクターをそれぞれ細胞計数キットキット8とプレートを用いて細胞増殖活性を測定し,ヨウ化プロピジウムとHOECHST33342染色により細胞死率を測定した。対照群,低酸素症対照群,低酸素+TRAP1干渉群,低酸素+TRAP1干渉群,低酸素+TRAP1干渉+COX II過剰発現群,低酸素+TRAP1干渉+COX2過剰発現各群の3穴、前4群の細胞の処理は同(2)、後2群の細胞はいずれもTRAP1 RNA干渉アデノウイルスベクターを導入した後、それぞれCOX IIを過剰発現し、アデノウイルスベクター本実験は3回繰り返した.データ分散分析とLSD検定を実施した。結果:(1)TRAP1群においてTRAP1発現があり,対照群においてTRAP1発現は観察されなかった。TRAP1の役割を果たす3つの蛋白質は,ケラチン,COX IIおよび予測分子量が13×103の未知蛋白質であった。(2)正常酸素対照群と比較して,正常酸素+TRAP1干渉群および正常酸素+TRAP1過剰発現群におけるCOX II MRNA発現は,有意に変化しなかった(P>0.05)。正常酸素+TRAP1干渉群のCOX II MRNA発現量は明らかに低下し(P<0.01)、酸素正常+TRAP1過剰群のCOX II MRNA発現量は明らかに上昇した(P <0.01)対照群と比較して,低酸素群のCOX II MRNA発現は有意に減少した(P<0.01)。対照群と比較して,低酸素+TRAP1干渉群および低酸素+TRAP1過剰発現群において,COX II MRNA発現は有意に変化しなかった(すべてのP<0.05)。低酸素+TRAP1干渉群のCOX II MRNA発現量は明らかに低下し(P<0.01)、低酸素+TRAP1過剰発現群のCOX II MRNA発現量は明らかに上昇した(P<0.01)(3)対照群,無酸素症対照群,低酸素+TRAP1過剰発現群,低酸素+TRAP1過剰発現群,低酸素+TRAP1過剰発現+COX II干渉群,低酸素+TRAP1過剰発現+COX死亡率は,それぞれ(4.7±1.5)%,(24.7±3.1)%,(26.0±2.7)%,(13.3±2.5)%,(12.7±2.1)%,(21.0±1.7)%であった。酸素正常対照群と比較して,酸素欠乏群の細胞増殖活性は減少し,細胞死は増加した(P<0.01)。対照群と比較して,低酸素+TRAP1過剰発現群の細胞増殖活性と細胞死亡率は有意に変化しなかったが(P>0.05),低酸素+TRAP1過剰発現群では細胞増殖活性と細胞死無酸素+TRAP1過剰発現群と比較すると、低酸素+TRAP1過剰発現+COX II干渉群の細胞増殖活性、細胞死亡率はいずれも明らかな変化がなかった(P>0.05)。低酸素+TRAP1過剰発現+COX II干渉群の細胞増殖活性は低下し、細胞死亡率は増加した(P<0.01)。(4)対照群,低酸素症対照群,低酸素+TRAP1干渉群,低酸素+TRAP1干渉群,低酸素+TRAP1干渉+COX II過剰発現群,低酸素+TRAP1干渉+COX II過剰細胞死亡率は,それぞれ(3.7±0.6)%,(21.0±2.7)%,(20.3±3.1)%,(31.7±2.5)%,(33.3±3.2)%,(19.3±1.5)%であった。低酸素+ブランク対照群と比較して,低酸素+TRAP1干渉群の細胞増殖活性と細胞死率は有意に変化しなかった(P>0.05)。低酸素+ブランク対照群および低酸素+TRAP1干渉群と比較して,低酸素+TRAP1干渉群の細胞増殖活性は減少し,細胞死は増加した(P<0.01)。低酸素+TRAP1群と比較して,低酸素+TRAP1干渉+COX II過剰発現群の細胞増殖活性と細胞死亡率は,有意に変化しなかった(P>0.05)。低酸素+TRAP1干渉+COX II群の細胞増殖活性は上昇し、細胞死亡率は低下した(P<0.01)。結論:TRAP1はCOX II MRNA発現を正に調節することができ、COX IIはTRAP1が低酸素心筋細胞を保護する下流効果分子である。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
