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J-GLOBAL ID：201702223280340098   整理番号：17A0106863

レンチウイルストランスフェクション蛍光蛋白質EYFP-H148Q152L細胞モデルの構築【JST・京大機械翻訳】

The cell model establishment through lentivirus transfecting fluorescent protein EYFP-H148Q/I152L

著者 (7件)： Xiao Yuan (Department of Geriatrics, Xijing Hospital of Fourth Military Medical University) ,  Xu Rong (Department of Geriatrics, Xijing Hospital of Fourth Military Medical University) ,  Li Xiumin (Department of Geriatrics, Xijing Hospital of Fourth Military Medical University) ,  Liu Yan (Department of Geriatrics, Xijing Hospital of Fourth Military Medical University) ,  Li Xing (Department of Geriatrics, Xijing Hospital of Fourth Military Medical University) ,  Huo Cong (Department of Geriatrics, Xijing Hospital of Fourth Military Medical University) ,  Wang Xiaoming (Department of Geriatrics, Xijing Hospital of Fourth Military Medical University)
資料名： Xi’An Jiaotong Daxue Xuebao. Yixue Ban  (Xi'An Jiaotong Daxue Xuebao. Yixue Ban)
巻： 37  号： 4  ページ： 478-483  発行年： 2016年 
JST資料番号： C3018A  ISSN： 1671-8259  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】アニオン(蛍光)蛋白質を安定的に発現するHELA細胞を,陰イオン(ハロゲン)チャネル遮断剤として使用する細胞モデルを構築し,ハイスループットスクリーニングのための陰イオンチャネル(剤)のための条件を提供する。【方法】遺伝子組換え技術を用いて,YFP突然変異蛋白質(EYFP-H148Q152L)とPUROMYCIN耐性を発現するレンチウイルスベクターを構築した。レンチウイルスベクターとパッケージングプラスミドを混合し、パッケージング細胞293T細胞にレンチウイルス粒子を産生し、HELA細胞に感染させ、さらに抵抗性遺伝子を用いて細胞をスクリーニングし、細胞を精製し、細胞質を精製する必要がある。リアルタイム定量的PCRとウエスタンブロット法を用いて,目的-H148Q152Lの発現を検出した。EYFP-HELA安定化細胞系は,ハロゲンのチャネル遮断薬としての活性を確認した。【結果】遺伝子配列決定により,標的遺伝子がレンチウイルスベクターに首尾よく挿入されたことを確認した。RT-PCRとウエスタンブロットの結果は,標的遺伝子がHELA細胞で過剰発現することを示した。蛍光顕微鏡下で,EYFP-HELA細胞系は,EYFPの黄色蛍光を発現することができ,効率は100%に近いことが観察された。ヨウ化物イオン(I)(低透過率)溶液は細胞陰イオン(ハロゲン)チャンネルの開放を刺激し,内部のI~-は黄色蛍光を消光させる。結論:構築したEYFP-HELA細胞系はEYFPの黄色蛍光タンパク質を安定的に発現させ、内流入細胞のI~-敏感に対して、理想的な陰イオン(ハロゲン)チャンネル遮断剤のスクリーニングモデルとすることができる。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *レンチウイルス ,  蛍光顕微鏡 ,  ウェスタンブロット法 ,  *蛍光 ,  RT-PCR法 ,  イオンチャンネル ,  ハロゲン
準シソーラス用語： 過剰発現 ,  標的遺伝子 ,  細胞株 ,  293T細胞 ,  レンチウイルスベクター ,  遺伝子組換 ,  *細胞モデル ,  *蛍光蛋白質 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (6件)： anion ,  halide ion ,  fluorescence protein ,  anion channel blocker ,  screening model ,  gene recombination

分類 (1件)： 遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (3件)： 蛍光蛋白質 ,  モデル ,  構築