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J-GLOBAL ID：201702230943506646   整理番号：17A0110311

アルファルファの夜蛾SiAn酸遺伝子のCDNA配列のクローニングと原核発現の研究【JST・京大機械翻訳】

cDNA cloning and prokaryotic expression of a serine protease from Heliothis viriplaca

著者 (5件)： Li Lili (College of Agronomy, Northeast Agricultural University) ,  Zhou Xiaoqun (College of Agronomy, Northeast Agricultural University) ,  Zhao Kuijun (College of Agronomy, Northeast Agricultural University) ,  Lei Lei (College of Agronomy, Northeast Agricultural University) ,  Fan Dong (College of Agronomy, Northeast Agricultural University)
資料名： Yingyong Kunchong Xuebao  (Yingyong Kunchong Xuebao)
巻： 53  号： 4  ページ： 706-715  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2743A  ISSN： 2095-1353  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]セリンプロテアーゼ(SERINE PROTEASE,SP)はセリンを活性中心とする重要な蛋白分解酵素である。昆虫において、セリンプロテアーゼは消化、発育、先天性免疫反応及び組織再建などの重要な生理過程に関与している。本研究では、アルファルファのHELIOTHIS VIRIPLACAを材料として、セリンプロテアーゼ遺伝子のCDNA配列をクローニングし、その遺伝子に対して原核発現を行い、発現産物に対して活性測定研究を行った。[方法]全RNAをアルファルファの中腸から抽出し,RT-PCRとRACEにより増幅し,大腸菌Eを用いた。大腸菌発現システムを発現させた。発現した組換えタンパク質を変性、精製し、BTEEを基質として活性測定を行った。[結果]クローンから得られたアルファルファの中腸セリンプロテアーゼ遺伝子はHVSPと命名され、この遺伝子はすでにGENBANKに登録され、登録番号はKT907053である。この遺伝子の全長は1BPであり、オープンリーディングフレームは886BPであり、295のアミノ酸をコードし、分子量は約30.8KUであり、等電点は8.27であり、推定したアミノ酸配列は他の昆虫のセリンプロテアーゼアミノ酸配列との類似性は46%~92%の間であった。TRIS-HCL緩衝液中で,PH8.5で,組換蛋白質の活性は28.7U/MLであった。蛍光定量的PCRの結果,HVSP遺伝子のMRNA発現はアルファルファの多くの組織で特異的に発現し,腸のMRNA発現は中腸で最も高かったが,唾液腺では検出されなかった。【結語】この研究は,アルファルファ 酸の酸遺伝子のCDNA配列をクローン化し,原核生物発現後の組換え蛋白質の変性,精製および再活性化により,昆虫の生理学的および生化学的機能の更なる探索のための基礎を提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： RT-PCR法 ,  基質 ,  分子量 ,  組換タンパク質 ,  クローン ,  セリンプロテイナーゼ ,  等電点 ,  *アルファルファ ,  中腸 ,  アミノ酸配列 ,  自然免疫 ,  定量的PCR法 ,  アミノ酸 ,  脂肪族アミン ,  脂肪族アルコール ,  脂肪族カルボン酸 ,  アミノアルコール ,  ヒドロキシ酸
準シソーラス用語： *クローニング , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： Heliothis viriplaca ,  serine protease ,  cloning ,  prokaryotic expression ,  enzyme activity

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子発現  (EC02040Q)

物質索引 (1件)： セリン

タイトルに関連する用語 (8件)： アルファルファ ,  夜蛾 ,  酸 ,  遺伝子 ,  cDNA配列 ,  クローニング ,  発現 ,  研究