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J-GLOBAL ID:201702262058393713   整理番号:17A0321631

圧延鎖増幅を組み合わせたクロノクーロメトリーによるDNAメチルトランスフェラーゼ活性の定量【Powered by NICT】

Quantitation of DNA methyltransferase activity via chronocoulometry in combination with rolling chain amplification
著者 (5件):
資料名:
巻: 85  ページ: 25-31  発行年: 2016年 
JST資料番号: D0173C  ISSN: 0956-5663  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: オランダ (NLD)  言語: 英語 (EN)
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本論文では,圧延鎖増幅(RCA)戦略は,DNAメチルトランスフェラーゼ(MTase)活性のクロノクーロメトリー検出のために提案した。簡単に言えば,二重DNAヘリックス構造を金電極の表面上に集合させた後,最初のM.SssI MTaseでメチル化すると,RCAはE.coliとphi29DNAポリメラーゼの存在下で実現した。,多数のヘキサアンミンルテニウム(III)塩化物([Ru(NH_3)_6)~3+,RuHex)は静電相互作用によりレプリコンに吸着され,大きな電気化学的読出しを生成し,信号は「オン」であった。これに反して,M.SssI MTaseの不在下で,非メチル化二重DNAヘリックス構造におけるメチル化されたCpG部位は特異的にH paIIにより認識され切断され,電極からのRCAの切断をもたらした。これは電極の表面上に吸収されるRuHexほとんど,信号は「オフ」であった。提案した方法に基づいて,M.SssI MTaseの活性は検出限界は0.09mLの(S/N=3)で60U/mLの範囲で分析した。添加では,M.SssI MTaseの活性に及ぼすプロカインとエピカテキンの阻害を評価した。提案した方法は,ヒト血清試料のような複雑なマトリックスに適用した場合,許容できる正確さ,精度と高感度を達成した。,提案した方法は臨床診断及び薬物開発のための潜在的に有用な平均した。Copyright 2017 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【Powered by NICT】
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バイオアッセイ  ,  酵素一般 
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