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J-GLOBAL ID：201702263010600685   整理番号：17A0077912

家 VP1遺伝子の原核発現とその間接ELISA法の確立と応用【JST・京大機械翻訳】

Development and application of indirect ELISA for detection of antibodies against encephalomyocarditis virus based on prokaryotic expression of VP1 protein

著者 (9件)： Liu Huimin (College of Life Science,Henan Agriculture University) ,  Chang Hongtao (College of Animal Medicine and Husbandry,Henan Agriculture University) ,  He Xiuyuan (College of Animal Medicine and Husbandry,Henan Agriculture University) ,  Chen Lu (College of Animal Medicine and Husbandry,Henan Agriculture University) ,  Yang Xia (College of Animal Medicine and Husbandry,Henan Agriculture University) ,  Wang Xinwei (College of Animal Medicine and Husbandry,Henan Agriculture University) ,  Li Yongtao (College of Animal Medicine and Husbandry,Henan Agriculture University) ,  Zhao Jun (College of Animal Medicine and Husbandry,Henan Agriculture University) ,  Wang Chuanqing (College of Animal Medicine and Husbandry,Henan Agriculture University)
資料名： Zhongguo Renshougonghuanbing Xuebao  (Zhongguo Renshougonghuanbing Xuebao)
巻： 32  号： 8  ページ： 728-733  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2253A  ISSN： 1002-2694  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】抗原として原核生物発現ベクター心筋1(VP1)を用いて,EMCV抗体を検出するための間接ELISA法を確立する。【方法】原核生物発現ベクターPET-28Aを用いて,家 VP1遺伝子の組換え発現プラスミドを構築し,BL21細胞に発現させ,組換え蛋白質を精製し,間接ELISAによる標準化プログラムを確立し,臨床検査に適用した。【結果】組換えプラスミドPET-28A-VP1を,制限酵素消化,PCR,および配列決定によって首尾よく構築し,形質転換後に発現し,SDS-PAGE電気泳動によって同定し,組換え蛋白質はEMCV陽性血清によって特異的に認識された。それは,良い反応性を持った。反応条件を最適化することにより,抗原濃度が1.25UG/ML,試験血清が1:80倍希釈された最適抗原濃度,および試験血清の最適希釈率が5%であり,血清の最適作用時間は37°C,60分であった。最適抗体濃度と最適反応時間はそれぞれ1:8000と37°C30分であり,基質の最適発色時間は20分,特異性は高く,感受性は高く,再現性は良好であった。この間接ELISA法を用いて,河南省の126の養豚場における1618の血清と527のPCV-2抗体の陽性血清を検出し,陽性検出率は65.87%であり,血清総陽性率は45.30%であった。異なる規模と異なる段階の豚群にはいずれもEMCV感染が存在し、中小型養豚場の陽性率は規模場より著しく高く、EMCVとブタ2型の混合感染率は75.14%に達した。結論:原核発現の組換えVP1タンパクを抗原として樹立した間接ELISA法はEMCV抗体のレベルを測定することができ、臨床検査の結果は河南省EMCV市の血清疫学のモニタリングの空白をカバーした。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 最適化 ,  プラスミド ,  基質 ,  血清 ,  標準化 ,  再現性 ,  希釈 ,  形質転換 ,  *ELISA ,  反応性 ,  SDS-PAGE ,  DNA制限酵素 ,  組換タンパク質
準シソーラス用語： 特異性 ,  *VP1蛋白質 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： encephalomyocarditis virus ,  VP1 protein ,  prokaryotic expression ,  indirect ELISA ,  clinical detection

分類 (2件)： 蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N) ,  微生物の生化学  (EG03020N)

タイトルに関連する用語 (7件)： 家 ,  VP1 ,  遺伝子 ,  発現 ,  間接 ,  ELISA法 ,  応用