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J-GLOBAL ID：201702266839835656   整理番号：17A0303122

RT-PCR法の確立と応用におけるアヒル I遺伝子型I II 型Jian別の診断と応用【JST・京大機械翻訳】

Establishment and Application of RT- PCR for Identification and Diagnosis of Duck reovirus Genotype I and II

著者 (7件)： Yun Tao (Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sciences, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences) ,  Zhang Cun (Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sciences, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences) ,  Hua Jionggang (Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sciences, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences) ,  Yu Bin (Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sciences, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences) ,  Ye Weicheng (Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sciences, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences) ,  Chen Liu (Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sciences, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences) ,  Ni Zheng (Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sciences, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences)
資料名： Nongye Shengwu Jishu Xuebao  (Nongye Shengwu Jishu Xuebao)
巻： 24  号： 12  ページ： 1964-1972  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2715A  ISSN： 1674-7968  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 臨床発病アヒル(ANAS PLATYRHYNCHOS DOMESTICA)群には2種類の遺伝子型Ya呼腸孤(ゲノム REOVIRUS, DRV)の感染が存在する。I型(( DRV, C-DRV)とII型(NOVEL DRV, N-DRV)の鑑別診断のための一段階RT-PCR法を確立した。本研究では、GENBANKに公表されている既存のC-DRVとN-DRV S1とS4遺伝子断片の配列を比較分析することにより、2対の特異的プライマーを設計し、プライマー濃度、アニーリング温度と循環回数などの増幅条件を最適化した。C-DRVとN-DRVの鑑別診断のための一段階RT-PCR法を確立した。結果は,一段階RT-PCRの最適反応系が以下の通りであることを示した。PRIMESCRIPT 1 STEP 用いた MIX 1 ΜL,2×1 STEP BUFFER 12.5 ΜL,RNAテンプレート1.5 ΜL,下流(20 ΜMOL/L)各1ΜL。RNASE 2 DH_2Oは25ΜLを補充した。最適反応条件は以下の通りであった。50°C,30分;94°C,2MIN;94°Cで30S変性し,55°Cで30Sアニールし,72°Cで30S延伸し,30サイクルを行った。この方法は,C-DRVとN-DRVゲノムからそれぞれ249と505BPの特異的フラグメントを増幅することができ,2つの特異的フラグメントを2つのウイルスゲノムの混合物から増幅することができた。しかし,通常のウイルスと正常細胞のゲノムは,同じ条件下で陰性であった。この方法は高い感度を持ち、その最低ウイルス検出量はそれぞれ0.47と0.62の半数の組織培養感染量(50% TISSUE CULTURE DOSE DOSE、TCID_(50))である。3つの異なる時間間隔で抽出されたウイルスRNAサンプルの3回の反復試験の結果は,すべて一致した。浙江省の2011~2015年に採取した239件の疑わしい臨床検体を検出し、C-DRVとN-DRVの陽性率はそれぞれ2.5%(6/239/))と31.4%(75/239/75/239)であった。陽性試料P10とP18の増幅配列の配列決定により、検出結果の正確性を実証した。本研究で樹立した二重一段階RT-PCRは2種類の遺伝子型DRVを有効に区別でき、しかも臨床サンプルの測定により、N-DRVは浙江省流行の優性遺伝子型であることが明らかになった。本研究はCDRVとN-DRVの鑑別診断に迅速、高感度及び低コストの実験室診断方法を提供し、この方法の確立はDRVの分子疫学的調査に有効な技術サポートを提供することができる。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ウイルス ,  *遺伝子型 ,  *RT-PCR法 ,  ゲノム ,  高感度 ,  *アヒル ,  RNA【核酸】 ,  鑑別診断 ,  最適化 ,  発病 ,  *遺伝子
準シソーラス用語： 分子疫学 ,  浙江省 ,  ウイルスRNA ,  ウイルスゲノム , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (3件)： Duck reovirus(DRV) ,  Multiplex one-step RT-PCR ,  Genotype

分類 (2件)： 微生物検査法  (EG02020G) ,  食品の汚染  (FJ01053P)

タイトルに関連する用語 (5件)： 応用 ,  アヒル ,  遺伝子型 ,  型 ,  診断