ブタ2型交差プライマーの恒温増幅検出法の確立【JST・京大機械翻訳】

Yuan Danyi; Jin Yanan; Li Ling; He Qian; Hu Lin; Li Xiaoqi; Sun Zhiyong

文献

J-GLOBAL ID：201702268309907187 整理番号：17A0062940

ブタ2型交差プライマーの恒温増幅検出法の確立【JST・京大機械翻訳】

Establishment of Cross Priming Isothermal Amplification for Porcine Circovirus 2Detection

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巻： 47 号： 9 ページ： 1905-1913 発行年： 2016年
JST資料番号： C2231A ISSN： 0366-6964 CODEN： CMHPAI 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：中国語 (ZH)

本研究では,ブタサーコウイルス2型(PCV2)の生物学的安全性管理のための技術的支援を提供するために,迅速,迅速かつ正確な方法を確立した。交差プライマーによる恒温増幅の原理を用いて,PCV2 CAP遺伝子に従って,一組の交差増幅プライマーを設計し,構築したCAP遺伝子組換えプラスミドを標準DNAテンプレートとして用いた。反応系のプライマー濃度,BETAINE,MGSO_4,DNTP,BST,反応温度及び時間を最適化し,核酸試験技術と結合して,PCV2を検出するための交差プライマーを確立した。確立したCPA検出法、ルーチンPCRとELISA法を用いてIFA法で較正した127の臨床サンプルを測定し、これらの方法の敏感性、特異性と一致率を比較した。結果は,最適反応系が,F3,B3,0.5ΜMOL・L(-1),CPR1ΜMOL・L(-1),DF5F0.7ΜMOL・L(-1),DF5B0.9ΜMOL・L(-1)であることを示した。BETAINE 0.075MOL・L(-1),MGSO_43MOL・L(-1),DNTPS0.4MMOL・L(-1),BST DNAポリメラーゼ9.6Uであった。確立した方法は58°Cで50分の検出を行い,検出限界は7.6コピーΜL(-1)に達し,感度は従来のPCRの10倍であった。PCV1,PRV,CSFV,PRRSV,PEDV,TGEVとRVとの交差反応はなかった。3つの検出法の感度はそれぞれ78.08%%~%%,特異性は87.03%%~92.59%,一致率は%%~%%,ROC曲線は3種類の検出方法の中でCPA検出方法の有効性が最も良かった。確立したブタ2型交差プライマーの恒温増幅検出方法はPCR装置を必要とせず、一つの水浴或いは金属浴はウイルスDNAの増幅を完成させ、密閉した核酸検出試験片は結果を直観的、客観的に判定し、しかもエーロゾル汚染を有効に避けることができる。この方法は,ブタサーコウイルス2型の迅速検出に適用できる。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

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ウイルスによる動物の伝染病 , 豚

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