文献

J-GLOBAL ID：201702269483575948   整理番号：17A0110310

アルファルファのクローニング,発現,および特性を研究した。【JST・京大機械翻訳】

cDNA cloning, expression and characterization of glucose oxidase from Heliothis viriplaca

著者 (5件)： Lei Lei (College of Agronomy, Northeast Agricultural University) ,  Zhao Kuijun (College of Agronomy, Northeast Agricultural University) ,  Gao Yanling (College of Agronomy, Northeast Agricultural University) ,  Li Lili (College of Agronomy, Northeast Agricultural University) ,  Fan Dong (College of Agronomy, Northeast Agricultural University)
資料名： Yingyong Kunchong Xuebao  (Yingyong Kunchong Xuebao)
巻： 53  号： 4  ページ： 696-705  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2743A  ISSN： 2095-1353  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】本研究の目的は,アルファルファ VIRIPLACAからのグルコースオキシダーゼ(GOX)遺伝子のCDNA配列をクローン化し,原核生物発現と活性を測定することであった。同時に、異なる組織におけるGOXの特異的発現及びグルコース誘導反応の特性について研究した。【方法】全RNAをアルファルファから抽出し,RT-PCRとCDNA末端迅速増幅技術を用いて,GOXの完全長CDNA配列を増幅した。原核生物発現ベクターPET-21Bを用いて,大腸菌におけるアルファルファ遺伝子を発現させ,NI-NTAアフィニティークロマトグラフィーによりHIS-TAGを精製し,勾配法により精製し,グルコースを基質として酵素活性を測定した。同時に,GOXの組織特異的発現とグルコースへの誘導反応を,REAL-TIME PCRによって分析した。[結果]このCDNA配列は2BPのオープンリーディングフレームを含み,607アミノ酸からなるポリペプチドをコードし,分子量は67.04KU,ポリペプチドの等電点は5.13であった。この配列はHVGOXと命名され、GENBANKの登録番号はKT907054である。配列解析の結果,HVGOXのアミノ酸配列は他の昆虫のGOXアミノ酸配列と高度に相同していることが示された。この遺伝子は大腸菌発現系において発現誘導に成功し,予測された蛋白質分子量と一致する融合蛋白質を発現した。原核発現ベクターにより発現された蛋白質は,変性,精製および再活性化により活性化された。REAL-TIME PCRの結果により、この遺伝子はアルファルファの異なる組織においてMRNAレベルの特異的な発現があり、その中で唾液腺の発現量が最も高いことが分かった。同時に,0.01%,0.1%,1%および10%ブドウ糖溶液に浸漬したダイズ葉では,幼虫内のGOXの発現が誘導され,10%の濃度で誘導発現量が最も高かった。【結語】本研究は,アルファルファ 内におけるグルコースオキシダーゼの新しい遺伝子を得て,この結果は,昆虫の生体内のグルコースオキシダーゼの生物学的機能の更なる研究のための基礎を提供した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： アミノ酸配列 ,  酵素活性度 ,  RT-PCR法 ,  グルコースオキシダーゼ ,  融合タンパク質 ,  分子量 ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  原核生物 ,  等電点 ,  *アルファルファ ,  クローン ,  基質 ,  ポリペプチド ,  ヘキソース ,  アルドース
準シソーラス用語： 発現ベクター , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： Heliothis viriplaca ,  glucose oxidase ,  cloning ,  expression ,  enzyme activity

分類 (4件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子発現  (EC02040Q) ,  遺伝子の構造と化学  (EC02020U) ,  遺伝子操作  (EC02050B)

物質索引 (1件)： グルコース

タイトルに関連する用語 (4件)： アルファルファ ,  クローニング ,  発現 ,  研究