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J-GLOBAL ID：201702270342399867   整理番号：17A0062926

ニワトリVISFATIN蛋白質の原核発現,精製およびその活性化について研究した。【JST・京大機械翻訳】

Prokaryotic Expression,Purification and Bioactivity Identification of Recombinant Chicken Visfatin Protein

著者 (9件)： Zhang Panpan# (Henan Innovative Engineering Researching Center of Poultry Germplasm Resources,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University) ,  Shang Pengfei# (Henan Innovative Engineering Researching Center of Poultry Germplasm Resources,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University) ,  Tian Fangyuan (Henan Innovative Engineering Researching Center of Poultry Germplasm Resources,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University) ,  Han Ruili (Henan Innovative Engineering Researching Center of Poultry Germplasm Resources,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University) ,  Jiang Ruirui (Henan Innovative Engineering Researching Center of Poultry Germplasm Resources,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University) ,  Sun Guirong (Henan Innovative Engineering Researching Center of Poultry Germplasm Resources,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University) ,  Kang Xiangtao (Henan Innovative Engineering Researching Center of Poultry Germplasm Resources,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University) ,  Liu Xiaojun (Henan Innovative Engineering Researching Center of Poultry Germplasm Resources,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University) ,  Tian Yadong (Henan Innovative Engineering Researching Center of Poultry Germplasm Resources,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University)
資料名： Xumu Shouyi Xuebao  (Xumu Shouyi Xuebao)
巻： 47  号： 9  ページ： 1785-1794  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2231A  ISSN： 0366-6964  CODEN： CMHPAI  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 本実験はクローン遺伝子をクローニングし、原核発現系に発現させ、純化し、3T3-L1細胞の分化によりその活性を検証し、鶏組換えVISFATINタンパク質の獲得に成功した。鋳型としてAAAAの全RNAを用い,QRT-PCRによりVISFATIN遺伝子を増幅し,PGEMに変換した。PET-30A-VISFATIN組換えプラスミドを含むE.COLI BL21(DE3)発現ベクターを,原核生物発現ベクターPET-30Aに変換した。組換え株をIPTGにより誘導し,発現条件を最適化し,SDS-PAGEにより同定した。ニッケルイオンアフィニティークロマトグラフィーを用いてVISFATIN蛋白質を精製し、WESTERN BLOTにより発現タンパク質を同定し、3T3-L1細胞の分化状況により発現タンパク質VISFATINの活性を同定した。結果:NCO I、XHOI I酵素消化により得られた結果は予期した目的バンドの大きさと一致し、PET-30A-VISFATIN発現ベクターを構築することに成功した。SDSの検出結果により、培地のPHが8.0、IPTGの最終濃度が0.4MMOL・L~(-1)、30°Cの条件下で、10~12時間の誘導において、可溶性タンパク質の発現量が最も大きいことが分かった。ニッケル蛋白質をニッケルイオンクロマトグラフィーによって精製し,SDS-PAGEの60KUにおいて予想される蛋白質バンドを観察した。WESTERN BLOTは精製タンパクが6*HISタグと特異的に結合できることを証明した。オイルレッドO染色の結果,対照群と比較してVISFATINにより誘導された3T3-L1細胞はより多くの脂質滴を形成した。QRT-PCRの結果,3T3-L1細胞の分化過程において,PPARΓ,AP2,FASおよびC/EBPΑの発現は,VISFATINによって有意に増加した(P<0.05)。本研究では、標準化された鶏VISFATIN組換えタンパク質の発現プログラムを確立し、生物活性を有する鶏VISFATINを獲得し、家禽領域における更なる研究のために基礎を築いた。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： SDS-PAGE ,  細胞分化 ,  標準化 ,  クローン ,  酵素的分解 ,  *タンパク質 ,  生物活性 ,  原核生物 ,  最適化 ,  ニッケル ,  プラスミド
準シソーラス用語： 3T3-L1細胞 ,  可溶性蛋白質 ,  発現ベクター , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： chicken recombinant Visfatin ,  cloning ,  prokaryotic expression ,  condition optimization ,  3T3-L1

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子発現  (EC02040Q)

物質索引 (1件)： オイルレッドO

タイトルに関連する用語 (6件)： ニワトリ ,  蛋白質 ,  発現 ,  精製 ,  活性化 ,  研究