CRISPR-Casシステムを介した植物ゲノム編集のための簡単で,融通の利くとハイスループットクローニングシステム【Powered by NICT】

Kim Hyeran; Kim Sang Tae; Ryu Jahee; Choi Min Kyung; Kweon Jiyeon; Kang Beumchang; Ahn Hyo Min; Bae Suji; Kim Jungeun; Kim Jin Soo; Kim Sang Gyu

文献

J-GLOBAL ID：201702280720155483 整理番号：17A0124177

CRISPR-Casシステムを介した植物ゲノム編集のための簡単で,融通の利くとハイスループットクローニングシステム【Powered by NICT】

A simple, flexible and high-throughput cloning system for plant genome editing via CRISPR-Cas system

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資料名：
巻： 58 号： 8 ページ： 705-712 発行年： 2016年
JST資料番号： C2552A ISSN： 1672-9072 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：オーストラリア (AUS) 言語：英語 (EN)

CRISPR-Cas9システムは,動物と植物における標的ゲノムの編集に広く用いられている。Streptococcus pyogenes(SpCas9)から誘導されたCas9蛋白質はキメラ単一ガイドRNA(sgRNA)が標的化する二本鎖DNAを切断する。植物ゲノム編集のために,アグロバクテリウムT-DNA形質転換はカリフラワーモザイクウイルス35SとU6/U3プロモーターの制御下でCas9蛋白質とsgRNAを発現させるために使用した。SpCas9発現カセットを含む大きなT-DNAバイナリーベクターにおける,標的遺伝子座の逆補体に結合する,sgRNAの19 20bpを簡単でハイスループットバイナリーベクターシステムクローンを開発した。Twostepクローニング法(1)バイナリーベクターのAarI制限酵素部位に特異的なオーバーハングを持つ二標的特異的オリゴヌクレオチドのアニーリング(2)ベクトルの二AarI部位へのアニールしたオリゴヌクレオチドを,陽性クローンのハイスループット生産を容易にする。さらに,Cas9コード配列とU6/U3プロモーターはゲートウェイ(TM)システムとベクトル上のユニークなEcoRI/XhoI部位を介して交換され,それぞれが容易である。はArabidopsis thalianaと野生タバコNicotiana attenuata(タバコ属)へのこれらの構築物を形質変換したときも,突然変異率とパターンを調べた。ベクトルはモデルおよび非モデル植物の標的大規模ノックアウト株を産生するのに有用であるsystemwill。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【Powered by NICT】

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著者キーワード (4件)： , , ,

遺伝子発現 , 遺伝子操作

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