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J-GLOBAL ID：201702285718198811   整理番号：17A0258079

レンチウイルス媒介安定発現はPRRSV複製を阻害するSHRNA細胞系の確立【JST・京大機械翻訳】

Establishment of Cell Lines with Stable Expression of shRNA to Inhibit Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Proliferation Using the Lentiviral Expression System

著者 (7件)： Wu Jinyan (Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences) ,  Tian Hong (Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences) ,  Shang Youjun (Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences) ,  Chen Yan (Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences) ,  Wang Guangxiang (Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences) ,  Liu Xiangtao (Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences) ,  Zhang Zhidong (Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences)
資料名： Xumu Shouyi Xuebao  (Xumu Shouyi Xuebao)
巻： 47  号： 11  ページ： 2280-2287  発行年： 2016年 
JST資料番号： C2231A  ISSN： 0366-6964  CODEN： CMHPAI  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： レンチウイルス発現技術を用いて、PRRSVの複製を安定的に抑制するSHRNAをMARC-145細胞に導入し、安定的に発現させ、PRRSVの複製を抑制するSHRNA-MARC陽性細胞クローンを構築した。また、細胞モデルのレベルからPRRSVの複製を抑制する重要な標的遺伝子の妨害効果を明らかにした。LR組換え技術を用いて、PENTR6/NSP9-4、PENTR6/NSP9-6及びPENTR6/-CONをそれぞれPDESTベクターとLR組換えし、発現骨格を獲得した。組換え型の発現ベクターは,トランスフェクション試薬によって最適化されたヘルパープラスミドVIRA POWER(TM)PACKAGING MIXと共に293-FTパッケージング細胞に形質移入し,慢病毒様-粒子細胞を感染させ,MARC-145細胞に感染させた。陽性細胞クローンを,殺稻瘟菌のスクリーニングによって得た。PCR,CPE,TCID_(50),REAL-TIME PCR及び間接免疫蛍光試験により,これらの細胞株の安定化及びそれらの発現に対するSHRNAの阻害効果を検証した。結果は以下を示した。優性干渉配列と無関係な配列は標的細胞ゲノムに安定に統合され、細胞病変の効果、免疫蛍光の産生状況、細胞の半数体の発現量、リアルタイムの定量分析の相対的発現量を観察したが、正常なMARC-145と整合していない配列の2つの陰性対照細胞と比較した。NSP9-4とNSP9-6を統合した2つの細胞は,PRRSVの複製を阻害するSHRNAを発現するため,PRRSVの感受性は減少し,その差は有意であった。それらをMARC/PU6/NSP9-4とMARC/6/NSP9-6と命名した。これらの結果は,2つの安定した発現ベクターが,PRRSVの複製を阻害するために,SHRNA6/NSP9-4,MARC/PU6/NSP9-6を構築するのに成功したことを示した。同時に、SHRNAの発現がないMARC/PU6-CONの細胞を獲得し、この細胞発現のSHRNAはPRRSVの複製を明らかに抑制する機能を持ち、細胞モデルのレベルからPRRSVの複製を抑制する重要な標的遺伝子を明らかにすることができる。また、PRRSV感染による宿主細胞の変化及び機体の病原機序などの研究にも資料を提供する。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ゲノム ,  半数体 ,  蛍光抗体法 ,  トランスフェクション ,  優性 ,  ベクター ,  *複製 ,  最適化 ,  蛍光
準シソーラス用語： 宿主細胞 ,  発現ベクター ,  標的遺伝子 ,  細胞モデル ,  クローン細胞 ,  *細胞株 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： PRRSV ,  shRNA ,  Marc-145 cells ,  lentiviral expression system

分類 (2件)： ウイルス感染の生理と病原性  (EG04042Y) ,  遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (7件)： レンチウイルス ,  安定発現 ,  PRRSV ,  複製 ,  阻害 ,  shRNA ,  細胞系