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J-GLOBAL ID：200902279658939137   整理番号：09A0196311

Pichia pastorisにおけるStereum purpureumエンドポリガラクツロナーゼIの発現,精製,およびグリコシル化とジスルフィド結合の解析

Expression, purification, and analyses of glycosylation and disulfide bonds of Stereum purpureum endopolygalacturonase I in Pichia pastoris

著者 (6件)： OGAWA Shun (Fac. of Agriculture and Life Sci., Hirosaki Univ., 3 Bunkyo-cho, Aomori Prefecture, Hirosaki 036-8561, JPN) ,  SHIMIZU Tetsuya (RIKEN, Harima, Hyogo Prefecture, JPN) ,  OHKI Hajime (Fac. of Agriculture and Life Sci., Hirosaki Univ., 3 Bunkyo-cho, Aomori Prefecture, Hirosaki 036-8561, JPN) ,  ARAYA Tomoyuki (Fac. of Agriculture and Life Sci., Hirosaki Univ., 3 Bunkyo-cho, Aomori Prefecture, Hirosaki 036-8561, JPN) ,  OKUNO Toshikatsu (Akita Univ. of Nursing and Welfare, Ohdate, Akita Prefecture, JPN) ,  MIYAIRI Kazuo (Fac. of Agriculture and Life Sci., Hirosaki Univ., 3 Bunkyo-cho, Aomori Prefecture, Hirosaki 036-8561, JPN)
資料名： Protein Expression and Purification  (Protein Expression and Purification)
巻： 65  号： 1  ページ： 15-22  発行年： 2009年05月 
JST資料番号： W0282A  ISSN： 1046-5928  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： Pichia発現系を使用して,Stereum purpureumエンドポリガラクツロナーゼI(EndoPGI)を発現し,CM25カラムクロマトグラフィーの使用により,1から3の糖鎖を有する3種の組換えEndoPCIの精製に成功した。EndoPGIに付け加えられた糖鎖はM8.M9,および/又は,M10高マンノース型であった。LC-MS解析の結果は,組換えEndoPGIが,4つのN-グリコシル化部位おいてランダムにグリコシル化されていることを示した。組換え酵素の熱変性カーブから,熱安定性で異なっているEndoPGIが,精製後の試料中に含まれていることが示唆された。したがって,LC-MS解析によって組換えEndoPGIのジスルフィド結合を調べた。結果として,第二,第三ジスルフィド結合のないペプチドを検出した。この結果は,Pichia発現系において,ジスルフィド結合に関して不完全な酵素が存在していることを初めて示した。Copyright 2009 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

シソーラス用語： *ペクチナーゼ ,  *ジスルフィド結合 ,  *遺伝子発現 ,  組換タンパク質 ,  熱安定性 ,  グリコシル化 ,  *糖鎖 ,  アミノ酸残基 ,  精製 ,  N-グリコシル化 ,  Pichia pastoris ,  ハラタケ亜門 ,  ピキア属 ,  Chondrostereum purpureum ,  *分子遺伝現象 ,  微生物 ,  酵母 ,  子嚢菌類酵母
準シソーラス用語： 菌じん類 ,  Pichia ,  Stereum purpureum ,  *エンドポリガラクツロナーゼ

分類 (4件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  酵素生理  (EG03052C) ,  糖質・糖鎖一般  (EB06010I) ,  分子構造  (EB03020Y)

タイトルに関連する用語 (7件)： Pichia ,  エンドポリガラクツロナーゼ ,  発現 ,  精製 ,  グリコシル化 ,  ジスルフィド結合 ,  解析