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J-GLOBAL ID：200902285769150630   整理番号：08A0530076

シルツイン酵素の高処理分析:マイクロ流体移動度シフト分析とバイオルミネセンス分析

High-throughput assays for sirtuin enzymes: A microfluidic mobility shift assay and a bioluminescence assay

著者 (5件)： LIU Yichin (Amgen Inc., One Amgen Center Drive, Thousand Oaks, CA 91320-1799, USA) ,  GERBER Raphaele (Caliper Life Sciences, 605 Fairchild Drive, Mountain View, CA 94043, USA) ,  WU John (Amgen Inc., One Amgen Center Drive, Thousand Oaks, CA 91320-1799, USA) ,  TSURUDA Trace (Amgen Inc., One Amgen Center Drive, Thousand Oaks, CA 91320-1799, USA) ,  MCCARTER John D. (Amgen Inc., One Amgen Center Drive, Thousand Oaks, CA 91320-1799, USA)
資料名： Analytical Biochemistry  (Analytical Biochemistry)
巻： 378  号： 1  ページ： 53-59  発行年： 2008年07月01日 
JST資料番号： H0177B  ISSN： 0003-2697  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 静止情報調節因子またはシルツイン(SIRT)酵素は,β-ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(酸化)(NAD⁺)依存性クラスIIIヒストンデアセチラーゼである。SIRT1活性を測定する2種類の方法(フルオロホア標識ペプチドを利用した微量流体素子移動度シフト分析,残存NAD⁺定量に基づくバイオルミネセンス分析)について述べた。移動度シフト分析は,付加陽電荷を持つ脱アセチル化生成物からのN-アセチル-リジン含有ペプチドの電気泳動分離を伴った。分離フルオロホア標識基質と生成物の直接可視化によるスクリーニングの際のフルオロホア標識化合物の干渉を最少化した。本分析法により,STR1の好ましいペプチド基質を同定した。NAD⁺バイオルミネセンス分析は,NAD⁺消費をデカナールの細菌ルシフェラーゼ触媒酸化に連結した。本法は標識ペプチド合成が不要であり,ペプチド基質に対するいかなる特異性のシルツリンにも適用できた。NAD⁺消費とペプチド脱アセチル化は,NAD⁺バイオルミネセンス分析で1:1の化学量論を示した。両分析法で測定したペプチドとNAD⁺消費の動力学パラメーターと標準参照阻害剤のIC₅₀値は同じであった。両方ともロバストZ′値(0.7)を持ち,高処理スクリーニングに用いることができた。Copyright 2008 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

シソーラス用語： *電気泳動 ,  フルイディクス ,  蛍光標識 ,  *生物ルミネセンス ,  ペプチド ,  濃度依存性 ,  酵素阻害剤 ,  乳酸デヒドロゲナーゼ ,  *脱アセチル ,  *アミドヒドロラーゼ ,  脂肪族化合物 ,  スルホキシド ,  補酵素 ,  アデニンヌクレオチド ,  ニコチンアミドヌクレオチド ,  ジヌクレオチド ,  窒素複素環化合物 ,  カルボアミド ,  マイクロフルイディクス ,  *サーチュイン ,  電気泳動移動度アッセイ ,  ビタミンB群
準シソーラス用語： アセチル化p53ペプチド ,  電気泳動移動度シフト分析 ,  微小流体素子

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  酵素製剤・酵素阻害剤の基礎研究  (GW21010W)

物質索引 (5件)： 6-クロロ-1,2,3,4-テトラヒドロ-9H-カルバゾール-1-カルボアミド ,  DMSO ,  NADH ,  NAD⁺ ,  ニコチンアミド

タイトルに関連する用語 (8件)： シルツイン ,  酵素 ,  分析 ,  マイクロ ,  流体 ,  移動度 ,  シフト ,  ルミネセンス分析