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J-GLOBAL ID：200902290144252268   整理番号：08A0722852

click化学による5-エチニル-2′-デオキシウリジン取り込みを用いたS期細胞周期進行の検出,5-ブロモ-2′-デオキシウリジン抗体使用に対する代替

Detection of S-phase cell cycle progression using 5-ethynyl-2′-deoxyuridine incorporation with click chemistry, an alternative to using 5-bromo-2′-deoxyuridine antibodies

著者 (6件)： BUCK Suzanne B. (Invitrogen Corp., OR) ,  BRADFORD Jolene (Invitrogen Corp., OR) ,  GEE Kyle R. (Invitrogen Corp., OR) ,  AGNEW Brian J. (Invitrogen Corp., OR) ,  CLARKE Scott T. (Invitrogen Corp., OR) ,  SALIC Adrian (Harvard Medical School, MA, USA)
資料名： BioTechniques  (BioTechniques)
巻： 44  号： 7  ページ： 927-929  発行年： 2008年06月 
JST資料番号： C0930C  ISSN： 0736-6205  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 短報  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： DNAを活発に合成している細胞周期S期細胞での従来法のBrdUを用いた欠点を回避できる改良法として5-エチニル-2′-デオキシウリジン(EdU)による標識,検出及び定量化法を示した。本改良はDNAへの5-ブロモ-2′-デオキシウリジン(BrdU)取込及び抗体染色ではなく,EdUの取込後のアジド基含有蛍光色素,Alexa Fluor 488との触媒Cu(I)介在性アジド-末端アルキンの位置選択的連結反応である段階的Huisgen[3+2]付加環化反応の利用である。本法は検出に対してDNAの問題となる厳しい処理を必要としないので大いに改善でき,細胞周期のための色素による同時染色ではDNAのヘリックス構造が保持され,多重大量処理分析に対して細胞表面抗体エピトープをも保持できた。更に,本法は分析の再現性を高め,時間を短縮でき,かつ従来法と同様に費用に対して最も効率的であった。Jurkat細胞を用いて従来のBrdU使用及び7-アミノアクチノマイシンD(7-AAD)による標識,並びに本改良法のEdU-蛍光色素結合と7-AADとによる標識,で得た両細胞のフローサイトメトリーを比較した。両細胞が類似の結果を示した。

シソーラス用語： *環化反応 ,  取込 ,  細胞周期 ,  標識法 ,  定量分析 ,  *DNA【核酸】 ,  蛍光体 ,  色素 ,  銅 ,  触媒 ,  位置特異性反応 ,  ヘリックス構造 ,  エピトープ ,  表面 ,  再現性 ,  Jurkat細胞 ,  フローサイトメトリー ,  デオキシリボヌクレオシド ,  ピリミジンヌクレオシド ,  有機臭素化合物
準シソーラス用語： *Alexa Fluor 488 ,  click化学 ,  Huisgen[3+2]付加環化反応 ,  S期 ,  位置選択性反応 ,  位置選択的連結反応 ,  蛍光色素 ,  細胞表面

分類 (3件)： 細胞分裂・増殖  (EF02020D) ,  遺伝子の構造と化学  (EC02020U) ,  腫ようの化学・生化学・病理学  (GE02030N)

物質索引 (3件)： 5-エチニル-2′-デオキシウリジン ,  5-ブロモ-2′-デオキシウリジン ,  7-アミノアクチノマイシンD

タイトルに関連する用語 (8件)： click化学 ,  5-エチニル-2′-デオキシウリジン ,  取り込み ,  S期 ,  細胞周期進行 ,  5-ブロモ-2′-デオキシウリジン ,  抗体 ,  代替