タンパク質を不安定化する方法とその使用

発明者： , , ,
出願人/特許権者：
代理人 (1件)：清水初志 (外1名)
公報種別：公表公報
出願番号（国際出願番号）：特願2001-555865
公開番号（公開出願番号）：特表2003-534775
出願日： 2001年02月02日
公開日（公表日）： 2003年11月25日
要約：

【要約】本発明は、生細胞中でタンパク質を不安定化する方法、および新規アッセイ法を開発する際におけるその使用に関する。一つの態様において本発明は、レポーター部分などの標的タンパク質を不安定化するための非切断性の多量体化ユビキチン融合タンパク質の使用を含む。本発明の方法の一つの局面においては、この構築物は、レポーター部分を多量体化ユビキチン融合タンパク質に動作可能的に結合させるリンカーも含む。この態様においては、リンカーが酵素的に修飾されることで、レポータータンパク質と多量体化ユビキチンドメインとの結合が調節され、レポーター部分の安定性が変化する。次に細胞内におけるレポーター部分のレベルを細胞内における酵素活性の指標として用いることができる。別の態様においては、本発明は、複数の標的タンパク質の細胞内濃度を協調的に調節する一般的な方法を提供する。本発明の方法の一つの局面においては、標的タンパク質は、プロテアーゼ切断部位を含むリンカーを介してユビキチン融合タンパク質に動作可能的に結合される。プロテアーゼでリンカーを切断すると、標的タンパク質と多量体化ユビキチン構築物との結合が解除され、また標的タンパク質の安定性および濃度が上昇する。

請求項（抜粋）：

以下の段階を含む、細胞内における活性を検出する方法;1)以下を含む細胞を提供する段階、 a)-NH-ユビキチンタンパク質エンドプロテアーゼによって切断されない、少なくとも1個の不安定化ドメイン、 b)レポーター部分、および c)不安定化ドメインをレポーター部分に動作可能的に結びつけるリンカー部分であって、活性に対する認識モチーフを含み、かつ活性によるリンカー部分の修飾が不安定化ドメインとレポーター部分の結びつきを調節することでレポーター部分の安定性を調節するリンカー部分であって、かつ -NH-ユビキチンタンパク質エンドプロテアーゼによって切断されないリンカー部分、2)レポーター部分、またはレポーター部分の産物を検出する段階。

IPC (13件)：

C12N 15/09 ZNA , A01K 67/027 , A01K 67/033 501 , A61K 45/00 , A61P 43/00 111 , C07K 14/47 , C07K 19/00 , C12N 1/15 , C12N 1/19 , C12N 1/21 , C12N 5/10 , C12Q 1/02 , C12Q 1/68

FI (14件)：

A01K 67/027 , A01K 67/033 501 , A61K 45/00 , A61P 43/00 111 , C07K 14/47 , C07K 19/00 , C12N 1/15 , C12N 1/19 , C12N 1/21 , C12Q 1/02 , C12Q 1/68 Z , C12N 15/00 ZNA A , C12N 5/00 B , C12N 5/00 C

Fターム (68件)：

4B024AA01 , 4B024AA11 , 4B024AA20 , 4B024BA11 , 4B024BA14 , 4B024BA79 , 4B024BA80 , 4B024CA04 , 4B024CA07 , 4B024DA03 , 4B024DA20 , 4B024EA02 , 4B024EA04 , 4B024FA02 , 4B024GA14 , 4B024GA25 , 4B024HA01 , 4B024HA11 , 4B024HA20 , 4B063QA01 , 4B063QA05 , 4B063QQ05 , 4B063QQ21 , 4B063QQ27 , 4B063QQ33 , 4B063QQ36 , 4B063QQ41 , 4B063QQ61 , 4B063QQ89 , 4B063QR48 , 4B063QR58 , 4B063QR74 , 4B063QR80 , 4B063QS36 , 4B063QX02 , 4B063QX07 , 4B063QX10 , 4B065AA01X , 4B065AA58X , 4B065AA72X , 4B065AA87X , 4B065AA93Y , 4B065AA94X , 4B065AB01 , 4B065AC14 , 4B065BA02 , 4B065BA03 , 4B065BA16 , 4B065BA30 , 4B065CA24 , 4B065CA29 , 4B065CA33 , 4B065CA44 , 4B065CA46 , 4C084AA17 , 4C084NA14 , 4C084ZC022 , 4C084ZC212 , 4H045AA10 , 4H045AA20 , 4H045AA30 , 4H045BA10 , 4H045BA41 , 4H045BA42 , 4H045CA40 , 4H045DA89 , 4H045EA50 , 4H045FA74

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