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J-GLOBAL ID：201002214568779242   整理番号：10A0580990

ハロヒドリンデハロゲナーゼ飽和変異誘発ライブラリーのスクリーニング用ハイスループット比色分析

A high-throughput colorimetric assay for screening halohydrin dehalogenase saturation mutagenesis libraries

著者 (3件)： TANG Lixia (School of Life Sci. and Technol., Univ. of Electronic Sci. and Technol. of China, Chengdu 610054, CHN) ,  LI Yang (School of Life Sci. and Technol., Univ. of Electronic Sci. and Technol. of China, Chengdu 610054, CHN) ,  WANG Xiong (School of Life Sci. and Technol., Univ. of Electronic Sci. and Technol. of China, Chengdu 610054, CHN)
資料名： Journal of Biotechnology  (Journal of Biotechnology)
巻： 147  号： 3-4  ページ： 164-168  発行年： 2010年06月 
JST資料番号： A0456C  ISSN： 0168-1656  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 筆者らはここで,ハロヒドリンデハロゲナーゼ(HheC)活性を測定するためのハイスループットなpH指示薬を利用した分析法を報告する。分析は,弱緩衝化系におけるフェノールレッドの560nmにおける吸光度変化および視覚的色変化に依存する。これは酵素の触媒する閉環反応からのプロトンの遊離に基づく。分析は,全細胞を使ってマイクロプレート方式で行なうことができ,分析を単純かつロバストにする。このように,それはライブラリースクリーニングに適している。分析法を,更に2種類の既に検討されたHheC変異株D80NおよびW249Fを用いて検証した。これらの株は,1,3-ジクロロ-2-プロパノールに対して,野性型HheCに比べて各々200倍低いおよび2倍高いk_cat値を有する。更に,HheCの飽和変異誘発ライブラリーをスクリーニングした。これには1,3-ジクロロ-2-プロパノールの変換を効果的に触媒する能力用に開発した分析法を用いた。500コロニーをスクリーニング後に,一変異株W139Cを同定し,更に精製して特性化した。速度論的解析により,得られた変異株は1,3-DCPおよび(R,S)-p-ニトロ-2-ブロモ-1-フェニルエタノールに対して,各々2および5倍のk_cat値を示した。もっともそれは野性型酵素に対してより高いK_m値を示す。ここに述べた手法は,ハロヒドリンデハロゲナーゼ変異株のハイスループットスクリーニングの要望に応える有用な道具を提示する。Copyright 2010 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

シソーラス用語： *ハロゲンヒドロラーゼ ,  *有機ハロゲン化合物 ,  変異誘発 ,  *ライブラリ【計算機】 ,  *スクリーニング ,  比色分析 ,  指示薬 ,  pH【水素イオン指数】 ,  スルトン ,  フェノール類 ,  芳香族縮合化合物 ,  ジオール ,  診断用薬
準シソーラス用語： デハロゲナーゼ ,  *ハイスループット ,  ハロヒドリン ,  *ハロヒドリンデハロゲナーゼ ,  マイクロプレート法 ,  飽和変異誘発

分類 (2件)： 遺伝的変異  (EC01030Y) ,  酵素一般  (EB09010D)

物質索引 (3件)： 1,3-ジクロロ-2-プロパノール ,  2-ブロモ-4-ニトロフェネチルアルコール ,  フェノールレッド

タイトルに関連する用語 (5件)： 飽和変異誘発 ,  ライブラリー ,  スクリーニング ,  ハイスループット ,  比色分析