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J-GLOBAL ID:201002226329726020   整理番号:10A0955679

Xanthomonas sp.由来のゴムオキシゲナーゼRoxAの相同発現系の開発

Development of a homologous expression system for rubber oxygenase RoxA from Xanthomonas sp.
著者 (3件):
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巻: 109  号:ページ: 1067-1075  発行年: 2010年09月 
JST資料番号: A0635A  ISSN: 1364-5072  CODEN: JAMIFK  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: イギリス (GBR)  言語: 英語 (EN)
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RoxAはゴム炭素骨格を未知のメカニズムにより切断する新型のジハエムジオキシゲナーゼである。大腸菌などによる機能的組換RoxAの発現は成功していないことから,この研究において,標記細菌種を用いて組換RoxAの相同宿主発現系の開発を検討した。エレクトロポーレーションによる形質転換系を検討し,接合移行系を標記細菌種に関して最適化した。roxA遺伝子の無傷コピーをラムノース非誘導性プロモーターの制御下で高宿主域ベクターにおいてクローン化した時,ラムノースの存在下で機能的RoxAの高発現レベルを達成した。精製組換RoxAの約6mgを1Lの培養液から取得し,この組換蛋白質は高度に活性であること及び野生型同様の性質を持つことを認めた。これらの結果により,相同宿主を用いた遺伝子操作により,RoxAの分子生物学的構造機能解析の基盤を提供した。
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分類 (2件):
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酵素一般  ,  微生物の生化学 
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