Bambusa oldhamiiのフェニルアラニンアンモニアリアーゼのクローニング,発現,部位特異的変異誘発と免疫局在決定

HSIEH Lu-sheng; MA Guo-jhang; YANG Chien-chih; YANG Chien-chih; LEE Ping-du; LEE Ping-du

文献

J-GLOBAL ID：201002234468538915 整理番号：10A1251913

Bambusa oldhamiiのフェニルアラニンアンモニアリアーゼのクローニング,発現,部位特異的変異誘発と免疫局在決定

Cloning, expression, site-directed mutagenesis and immunolocalization of phenylalanine ammonia-lyase in Bambusa oldhamii

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資料名：
巻： 71 号： 17-18 ページ： 1999-2009 発行年： 2010年12月
JST資料番号： D0116B ISSN： 0031-9422 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：イギリス (GBR) 言語：英語 (EN)

Bambusa oldhamii殻から,アオタケのフェニルアラニンアンモニアリアーゼ(PAL,EC 4.3.1.5)を分離して,クローニングした。タケ殻PALのL-Pheに対するK_mは476μMで,天然PALの推定分子量は275kDa,サブユニット分子質量は約76kDaであった。これは,タケPALが四量体として存在することを示した。PAL活性の最適温度は50°Cで,最適pHは9.0であった。精製タケ殻PALの同一性を,Q-TOFタンデムMS/MS de novoシークエンシングを用いて確認した。BoPAL1~BoPAL4と呼称した4種のPAL遺伝子を,B.oldhamiiからクローニングした。BoPAL3とBoPAL4のオープンリーディングフレームは2142と2109bpサイズであった。BoPAL2~4は,1つのイントロンと2つのエクソンを含有していたが,BoPAL1ではイントロンが見られなかった。大腸菌に発現させたBoPAL4は,PALとチロシンアンモニアリアーゼ,両活性を有していた。組換野生型PAL蛋白質は天然タケ殻PALと同じ生化学特性を持っていたが,BoPAL1 F133HとBoPAL2 F134Hの部位特異的変異誘発は,共にL-Pheに対するk_cat/K_m値の減少を示した。さらに,BoPAL2 F134HはL-Tyrに対するk_cat/K_m値の微増を示した。これらのデータは,他の残基がPhe/Tyr基質特異性を主に調節していることを示唆した。組織化学研究のために,精製殻PALに対して上昇する抗体を生成した。タケ殻と枝シュートにおいて,PALは主に厚膜細胞に局在していた。Copyright 2010 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

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酵素一般 , 酵素生理

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