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J-GLOBAL ID：201002255292050403   整理番号：10A0004907

非触媒ドメインを持たないClostridium thermocellumキシラナーゼの発現と活性収率の増強

Enhanced expression and activity yields of Clostridium thermocellum xylanases without non-catalytic domains

著者 (6件)： SAJJAD Muhammad (School of Biological Sciences, Quaid-e-Azam Campus, Univ. of the Punjab, Lahore-54590, PAK) ,  KHAN M. Imran M. (School of Biological Sciences, Quaid-e-Azam Campus, Univ. of the Punjab, Lahore-54590, PAK) ,  AKBAR Nadeem S. (School of Biological Sciences, Quaid-e-Azam Campus, Univ. of the Punjab, Lahore-54590, PAK) ,  AHMAD Sajjad (School of Biological Sciences, Quaid-e-Azam Campus, Univ. of the Punjab, Lahore-54590, PAK) ,  ALI Imran (School of Biological Sciences, Quaid-e-Azam Campus, Univ. of the Punjab, Lahore-54590, PAK) ,  AKHTAR M. Waheed (School of Biological Sciences, Quaid-e-Azam Campus, Univ. of the Punjab, Lahore-54590, PAK)
資料名： Journal of Biotechnology  (Journal of Biotechnology)
巻： 145  号： 1  ページ： 38-42  発行年： 2010年01月01日 
JST資料番号： A0456C  ISSN： 0168-1656  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 嫌気好熱性細菌,Clostridium thermocellumの2つの主要キシラナーゼ成分,XynCとXynZをクローン化して,大腸菌に非触媒ドメイン有無で発現させた。XynCの2つの構成物,1つはセルロース結合ドメインと触媒ドメインを持つもの(pXynC-BC),もう1つは触媒ドメインしか持たないもの(pXynC-C)を生成した。XynZに関して生成した構築物は,ドックリンドメインを含むpXynZ-EDCと含まないpXynZ-Cであった。pXynC-BCまたはpXynZ-BDCで形質転換した大腸菌細胞,それぞれは全細胞蛋白質の30%と25%のキシラナーゼ発現を与えた。触媒ドメインだけを持つ構築物による大腸菌の形質転換は,それぞれのケースで~45%の発現量を与えた。XynCの比活性は,非触媒ドメイン有無にかかわらず同じであった。しかし,XynZでは,非触媒ドメインを持たない酵素の比活性は完全酵素の~5倍以上大きかった。全活性は,XynC-BCの1925UI^-1OD^-1₆₀₀からXynC-Cの3050UI^-1OD^-1₆₀₀へ増大した。しかし,XynZ-BDC(3665UI^-1OD^-1₆₀₀)に対してXynZ-C(32900UI^-1OD^-1₆₀₀)の全体的活性増加は,~9倍高かった。両酵素とも,非触媒ドメインの有無にかかわらず広pH範囲(pH4~9)で全く安定であった。XynZ-CはXynZ-BDCより熱安定性で,70°C,2時間のインキュベーションにおいて,XynZ-BDCの42%に比べて,70%の活性を保持した。しかし,XynC-BCは70°C,2時間のインキュベーションで70%の活性を保持したが,XynC-Cは同条件で全活性を失った。可溶性キシランを用いて測定した,Xyn-BCとXynC-CのK_m値は33.3と15.4mgml^-1であった。このように,XynCとXynZの触媒ドメインだけを発現することによるキシサナーゼ活性生成は,有意に増強された。Copyright 2009 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

シソーラス用語： *キシラナーゼ ,  *組換タンパク質 ,  Clostridium thermocellum ,  遺伝子クローニング ,  アミノ酸配列 ,  熱安定性 ,  pH依存性 ,  経時変化 ,  *遺伝子発現 ,  *酵素活性度 ,  結合部位 ,  大腸菌 ,  タンパク質
準シソーラス用語： ドックリン

分類 (3件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  微生物酵素の生産  (FK03030L) ,  遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (7件)： 触媒ドメイン ,  Clostridium ,  キシラナーゼ ,  発現 ,  活性 ,  収率 ,  増強