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J-GLOBAL ID：201002265597493661   整理番号：10A0214106

ヒトペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アルファリガンド結合ドメインのリガンド増強発現と細胞内アッセイ

Ligand-enhanced expression and in-cell assay of human peroxisome proliferator-activated receptor alpha ligand binding domain

著者 (4件)： VELKOV Tony (School of Medicine, Deakin Univ., Pigdons Road, Geelong, 3217 Vic., AUS) ,  VELKOV Tony (Dep. of Medicinal Chemistry and Drug Action, Monash Inst. of Pharmaceutical Sciences, Monash Univ., 381 Royal Parade ...) ,  RIMMER Kieran A. (Dep. of Medicinal Chemistry and Drug Action, Monash Inst. of Pharmaceutical Sciences, Monash Univ., 381 Royal Parade ...) ,  HEADEY Stephen J. (Dep. of Medicinal Chemistry and Drug Action, Monash Inst. of Pharmaceutical Sciences, Monash Univ., 381 Royal Parade ...)
資料名： Protein Expression and Purification  (Protein Expression and Purification)
巻： 70  号： 2  ページ： 260-269  発行年： 2010年04月 
JST資料番号： W0282A  ISSN： 1046-5928  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： ヒトペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アルファリガンド結合ドメイン(PPARαLBD)-マルトース結合蛋白質融合構成物は大腸菌で発現された。ヒトPPARαLBD(aa196-468)をコードしているコードを最適化したDNA配列は合成され,MBP溶解性融合タグと間欠TEVプロテアーゼ開裂部位のpDEST17E.coli発現ベクター下流に結合された。28°Cにおける自己誘導の後,PPARαLBD蛋白質はニッケル親和性クロマトグラフィー段階,カラム上TEVプロテアーゼ開裂,続いてのSephacryl S200サイズ排除クロマトグラフィーによって電気泳動的に均一に精製された。組換蛋白質はヤギ抗ヒトPPARαポリクローナル抗体と交差反応を示し,トリプシン分解ペプチド質量フィンガープリントでヒトPPARαと同一であった。PPARα特異的リガンド(フェノフィブリン酸,GW7647,又はGW590735)の増殖培地への添加はPPARαLBD構造を有意に安定化し,可溶性蛋白質の発現を増強した。増殖培地中でリガンド濃度の関数としてPPARαLBD発現の増強を測定することにより細胞中のリガンド結合を調べた。効率的発現と報告されたPPARαLBD構成物の細胞内アッセイは,創薬プログラムにおけるハイスループットスクリーニングアッセイに適している。Copyright 2010 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

シソーラス用語： スクリーニング ,  *PPARα ,  *融合タンパク質 ,  ヒト ,  大腸菌 ,  *遺伝子発現 ,  培養条件 ,  構造 ,  アミノ酸配列 ,  結合部位
準シソーラス用語： ドメイン ,  ハイスループットスクリーニング ,  *異種発現

分類 (1件)： 遺伝子操作  (EC02050B)

物質索引 (3件)： GW-7647 ,  フェノフィブリン酸 ,  GW-590735

タイトルに関連する用語 (7件)： ヒト ,  ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体 ,  リガンド結合ドメイン ,  リガンド ,  増強 ,  発現 ,  アッセイ