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J-GLOBAL ID：201002287746964480   整理番号：10A0447880

蛍光異方性減衰に基づく蛋白質相互作用の新規ステロイド検出モデルと特性化

Novel Steroid-Sensing Model and Characterization of Protein Interactions Based on Fluorescence Anisotropy Decay

著者 (9件)： CHANG Ko-Shing (National Chiao Tung Univ., Hsinchu, TWN) ,  LUO Liyang (National Chiao Tung Univ., Hsinchu, TWN) ,  LUO Liyang (Academia Sinica, Taipei, TWN) ,  CHANG Chih-Wei (National Chiao Tung Univ., Hsinchu, TWN) ,  HUANG Yen-Chieh (National Chiao Tung Univ., Hsinchu, TWN) ,  CHENG Chih-Yu (National Chiao Tung Univ., Hsinchu, TWN) ,  HUNG Chen-Shiung (Academia Sinica, Taipei, TWN) ,  DIAU Eric Wei-Guang (National Chiao Tung Univ., Hsinchu, TWN) ,  LI Yaw-Kuen (National Chiao Tung Univ., Hsinchu, TWN)
資料名： Journal of Physical Chemistry B  (Journal of Physical Chemistry B)
巻： 114  号： 12  ページ： 4327-4334  発行年： 2010年04月01日 
JST資料番号： W0921A  ISSN： 1520-6106  CODEN： JPCBFK  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： アメリカ合衆国 (USA)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 蛋白質活性側鎖の近傍残基に共有結合したアルキル結合を有する配位子の分子内結合は新規ステロイド検出モデルを形成する。分子内蛋白質-配位子相互作用を組入れるため構築したステロイド認識系応用を考察した。Δ⁵-3-ケトステロイドイソメラーゼ(KSI)と5-((2-アミノエチル)アミノ)-1-ナフタレンスルホン酸(1,5-EDANS)部分を含む配位子を用い分子内蛋白質-配位子相互作用により構築したステロイド認識モデルはジスルフィド結合生成を通してKSIのCys-86でこの配位子とユニークに共役するように加工KSIを設計した。蛍光スペクトルを用い,疎水性相互作用が仲介する定常状態蛋白質-配位子結合を確認し,タンデム質量分析により発蛍光団標識付けペプチド配列を同定した。種々の発蛍光団標識付けKSI突然変異体の定常状態蛍光スペクトル比較は発光特性が環境因子で変化することを示した。発蛍光団の蛍光異方性減衰評価は分子内蛋白質-配位子結合相互作用の存在を指示した。蛋白質-配位子複合体の時間分解蛍光異方性測定はステロイド結合ドメインの内部または外部で発蛍光団位置に関連した発蛍光団の自由度を表す異方性減衰値を生じた。19-ノルアンドロステンジオン(19-NA)をこの蛋白質-配位子系に添加すると配位子とステロイド間の競争結合を観測した;この知見は加工KSIを用いてステロイド検出を設計する実現可能性を確証した。超薄型p型電界効果トランジスタとこの蛋白質-配位子系の統合に関して,非荷電19-NAがμmol水準で検出(Biosens.Bioelectron.2008,23,1983)できるようになった。

シソーラス用語： *バイオセンサ ,  *ノルステロイド ,  タンパク質複合体 ,  タンパク質結合 ,  分子間相互作用 ,  分子認識 ,  *ステロイドイソメラーゼ ,  突然変異体 ,  ジスルフィド結合 ,  共有結合 ,  *光プローブ ,  発色団 ,  標識法 ,  蛍光標識 ,  スルホン酸 ,  芳香族アミン ,  蛍光スペクトル ,  疎水性相互作用 ,  定常特性 ,  タンデム質量分析 ,  異方性 ,  蛍光測定 ,  時間分解分光法 ,  結合部位 ,  自由度 ,  FET【トランジスタ】 ,  化学結合 ,  アミノ酸配列 ,  実現可能性 ,  近似法 ,  エノン ,  脂環式ケトン ,  ジケトン
準シソーラス用語： ケトステロイドイソメラーゼ ,  リガンド結合ドメイン ,  環境因子 ,  競争結合 ,  蛍光プローブ ,  蛍光異方性 ,  定常状態特性 ,  電界効果トランジスタ ,  発蛍光団 ,  標識付け ,  あてはめ【近似法】

分類 (2件)： 分析機器  (CC02020S) ,  有機化合物のルミネセンス  (BM08094A)

物質索引 (2件)： 19-ノルアンドロステンジオン ,  N,N′-ビス[2-(5-スルホ-1-ナフチルアミノ)エチル]-5,6-ジチアデカンビスアミド

タイトルに関連する用語 (6件)： 蛍光異方性 ,  減衰 ,  蛋白質相互作用 ,  ステロイド ,  モデル ,  特性化