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J-GLOBAL ID：201002289287227810   整理番号：10A0516504

大腸菌におけるヒト血管内皮増殖因子VEGF₁₆₅の高収率発現と臨床応用のための精製

High-yield expression of human vascular endothelial growth factor VEGF₁₆₅ in Escherichia coli and purification for therapeutic applications

著者 (13件)： PIZARRO Shelly A. (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  GUNSON Jane (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  FIELD Matthew J. (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  DINGES Rachel (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  KHOO Stefanie (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  DALAL Milind (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  LEE Michael (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  KALEAS Kimberly A. (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  MOISEFF Kathryn (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  GARNICK Susan (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  REILLY Dorothea E. (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  LAIRD Michael W. (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA) ,  SCHMELZER Charles H. (Genentech, Inc., Process Res. and Dev., 1 DNA Way, South San Francisco, CA 94080, USA)
資料名： Protein Expression and Purification  (Protein Expression and Purification)
巻： 72  号： 2  ページ： 184-193  発行年： 2010年08月 
JST資料番号： W0282A  ISSN： 1046-5928  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 血管内皮増殖因子(VEGF₁₆₅)は,in vivoで血管新生と血管透過性を誘導し,創傷治癒を促進するための臨床的応用の可能性が明らかになっている強力な分裂促進因子である。高収率,ならびに高純度,品質,および力価を提供する工業的な製造方法が必要とされる。この報告に記載の行程は培養液のリットル当り約9gのrhVEGFを生成することができる細菌発現系と,蛋白質の再折畳みから成る下流の精製行程と,製剤原料の製剤化に先立っての3つクロマトグラフィー段階を含んでいる。高細胞密度(HCD)フィード-バッチ発酵過程は,rhVEGFをペリプラズム封入体で生産するために使用された。封入体は細胞溶解液から回収され,精製のためのrhVEGFを抽出するため,単一段階の蛋白質可溶化と再折り畳み操作を受けた。再折畳みとクロマトグラフィーを含む,開発中の観察された全体の回収収率は30±6%であった。宿主細胞の不純物は,行程の頑健性を示して,研究室と大規模の両者で,目標レベル以下で一貫してパスした。再折畳み,精製rhVEGFの構造は,質量分析,N-端配列決定,およびトリプシン分解ペプチドマップにより確認された。一方で,生産物バリアントは多重HPLCアッセイにより解析した。生物学的活性はヒト臍帯静脈由来内皮細胞の増殖によって検証された。Copyright 2010 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

シソーラス用語： *VEGF ,  血管内皮細胞 ,  培養細胞 ,  折畳み構造 ,  大腸菌 ,  *組換タンパク質 ,  細胞培養 ,  封入体 ,  可溶化 ,  精製
準シソーラス用語： HUVEC細胞 ,  *VEGF165 ,  高密度培養 ,  蛋白質折畳み

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  微生物,組織・細胞培養による物質生産一般  (FK03010P)

タイトルに関連する用語 (9件)： 大腸菌 ,  ヒト ,  血管内皮増殖因子 ,  VEGF165 ,  収率 ,  発現 ,  臨床 ,  応用 ,  精製