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J-GLOBAL ID：201002289310654534   整理番号：10A0451093

機能的尿酸-キサンチントランスポーター(UapA)の発現と精製

Expression and purification of a functional uric acid-xanthine transporter (UapA)

著者 (6件)： LEUNG James (Div. of Molecular Biology, Imperial Coll. London, London SW7 2AZ, GBR) ,  KARACHALIOU Mayia (Fac. of Biology, Dep. of Botany, Univ. of Athens, Panepistimioupolis 15781, Athens, GRC) ,  ALVES Claudia (Div. of Molecular Biology, Imperial Coll. London, London SW7 2AZ, GBR) ,  ALVES Claudia (Dep. of Biochemistry, Univ. of Alberta, Edmonton, CAN) ,  DIALLINAS George (Fac. of Biology, Dep. of Botany, Univ. of Athens, Panepistimioupolis 15781, Athens, GRC) ,  BYRNE Bernadette (Div. of Molecular Biology, Imperial Coll. London, London SW7 2AZ, GBR)
資料名： Protein Expression and Purification  (Protein Expression and Purification)
巻： 72  号： 1  ページ： 139-146  発行年： 2010年07月 
JST資料番号： W0282A  ISSN： 1046-5928  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 核酸塩基-アスコルビン酸トランスポーター(NAT)ファミリーには,尿酸やビタミンCのような主要な細胞性代謝物の取り込みに基本的な機能を有するキャリア蛋白質が含まれる。NATトランスポーターの最も良く研究された例は,子嚢菌Aspergillus nidulansモデルの尿酸-キサンチンパーミアーゼ(UapA)である。遺伝的,生化学的な詳細解析でこの蛋白質の作用機構について多くが明らかとなった;しかし,真核細胞膜蛋白質の取り扱いに伴う難しさのため,構造解析によるUapAの詳細な構造-機能相関研究は制限されてきた。この論文で,異種のSaccharomyces cerevisiaeでのGFPとの融合蛋白質としての機能的UapAの異種大量発現について記述した。主要な液胞型エンドペプチダーゼを欠損したpep4Δ欠失株で2.3mg/L,Rsp5ユビキチンリガーゼ活性が欠損したnpi1-1突然変異株で3.8mg/Lの収率で,UapA-GFPは発現した。落射蛍光顕微鏡により,npi1-1突然変異株の細胞膜でより強い蛍光強度が認められたが,UapA-GFPが両株の細胞膜に優勢に局在していることを示した。これらの観察と一致して,pep4Δ欠失株と比較するとnpi1-1突然変異株での[³H]-キサンチンの取り込みが約5倍増加していた。機能的な発現での最良の収率にもかかわらず,npi1-1突然変異株でのUapA-GFPのゲル中の蛍光は非常に蛋白質分解の影響を受けやすいことが明らかになった。pep4Δ欠失株を使った蛋白質の大規模発現に続く精製で,さらなる構造と機能研究に適した純粋な単分散蛋白質をmg量で生産した。加えて,この重要なモデル蛋白質の作用機構を理解するための逆遺伝学と他のターゲット研究法を実行する酵母細胞系がこの研究により作り出された。Copyright 2010 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.

シソーラス用語： *膜タンパク質 ,  *微生物タンパク質 ,  遺伝子発現 ,  精製 ,  Saccharomyces cerevisiae ,  緑色蛍光タンパク質 ,  *融合タンパク質 ,  ペプチド結合ヒドロラーゼ ,  遺伝子 ,  欠失突然変異 ,  突然変異体 ,  蛍光顕微鏡 ,  ユビキチン活性化酵素 ,  細胞膜 ,  *細胞内分布 ,  取込 ,  放射強度 ,  タンパク質分解 ,  遺伝学 ,  ターゲティング ,  顕微鏡観察 ,  経時変化 ,  Aspergillus nidulans
準シソーラス用語： 為巣性麹菌 ,  npi1遺伝子 ,  pep4遺伝子 ,  UapA ,  エンドペプチダーゼ ,  異種発現 ,  逆遺伝学 ,  蛍光強度 ,  *尿酸-キサンチントランスポーター ,  落射蛍光顕微鏡

分類 (3件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  微生物の生化学  (EG03020N) ,  細胞膜の輸送  (EF04020R)

タイトルに関連する用語 (3件)： 尿酸 ,  発現 ,  精製