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J-GLOBAL ID：201102218735842450   整理番号：11A1027647

マウス精巣上体分泌蛋白,Spink12の原核生物的発現と精製

Prokaryotic expression and purification of Spink12, a mouse epididymal secretary protein

著者 (4件)： TIAN Li-yuan (Inst. of Biotechnology,Acad. of Military Medical Sciences, Beijing) ,  LI Xiu-li (Inst. of Biotechnology,Acad. of Military Medical Sciences, Beijing) ,  WANG Li (Inst. of Biotechnology,Acad. of Military Medical Sciences, Beijing) ,  WANG Yu-min (Inst. of Biotechnology,Acad. of Military Medical Sciences, Beijing)
資料名： Jiefangjun Yixue Zazhi  (Jiefangjun Yixue Zazhi)
巻： 35  号： 2  ページ： 197-200  発行年： 2010年 
JST資料番号： C2022A  ISSN： 0577-7402  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】E.coli-BL21中で融合蛋白(6×His-Spink12)を発現,精製し,Spink12の免疫避妊効果を検討する。【方法】マウス精巣上体の総RNAを抽出した。シグナルペプチド配列を持たないSpink12蛋白コード化エクソンをRT-PCR法で増幅し,制限酵素(Nde-IとEcoR-I)で消化後,N端に6×Hisタグを持つ原核生物的発現ベクトル,pET28(a)に移入した。酵素消化と配列決定で確認後,得られた組み換えプラスミド,pET28a-Spink12をE.coli-BL21のコンピテント細胞に移入した。IPTG誘導により発現した融合蛋白(6×His-Spink12)をSDS-PAGE法とウェスタンブロッティング法で分析した。イミダゾール勾配法で粗生成物を精製し,抗Hisモノクローナル抗体によるウェスタンブロッティング法で確認した。【結果】酵素消化と配列決定の結果,組み換え原核生物的発現ベクトル,pET28a-Spink12の構築が確認できた。pET28a-Spink12をE.coli-BL21のコンピテント細胞に移入,IPTG誘導後,SDS-PAGE法で得られた組み換え標的蛋白(約9kDa)は理論値に一致した。この融合蛋白は総E.coli細胞蛋白の23.5%であった。抗Hisモノクローナル抗体によるウェスタンブロッティング法の結果,得られたバンドは融合蛋白(6×His-Spink12)であった。Ni-NTAで精製後,融合蛋白(6×His-Spink12)の純度は91.1%であった。【結論】E.coli-BL21中での融合蛋白(6×His-Spink12)発現,精製に成功した。Spink12の免疫避妊効果研究の基礎データとなり得る。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： マウス ,  精巣上体 ,  *タンパク質 ,  原核生物 ,  融合タンパク質 ,  免疫 ,  受胎調節 ,  SDS-PAGE ,  RT-PCR法
準シソーラス用語： *蛋白 ,  融合蛋白 ,  避妊

分類 (1件)： 蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N)

タイトルに関連する用語 (6件)： マウス ,  精巣上体 ,  分泌 ,  蛋白 ,  原核生物的発現 ,  精製