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J-GLOBAL ID：201102239674965292   整理番号：11A1199406

肺癌細胞における組換えhsa-pri-miR-155アデノウイルスの構築,発現及び同定

Construction, expression, and identification of recombinant hsa-pri-miR-155 adenovirns in lung cancer cells

著者 (5件)： HUANG Gang (Dep. 4,Inst. of Surgery Res.,Doping Hospital, Third Military Medical Univ., Chongqing) ,  WANG Haiyan (Dep. 4,Inst. of Surgery Res.,Doping Hospital, Third Military Medical Univ., Chongqing) ,  WANG Kai ,  JIANG Jianxin (Dep. 4,Inst. of Surgery Res.,Doping Hospital, Third Military Medical Univ., Chongqing) ,  BAI Yun
資料名： Mianyixue Zazhi  (Mianyixue Zazhi)
巻： 26  号： 3  ページ： 246-250,254  発行年： 2010年 
JST資料番号： C2408A  ISSN： 1000-8861  CODEN： MIZAED  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 本研究の目的は,ヒト成熟miR-155の発現のための組換えアデノウイルスを調製し,肺癌細胞A549において組換えアデノウイルスを発現させ,その生物活性を同定することである。最初に鋳型として,miR-155をコードしている配列を健常者ボランティアのgDNAからPCR法で増幅し,pTA2Tベクターにクローニングし,配列を決定した。引き続いて完全鎖長pri-miR-155をコードしているDNAをpAdTrack-CMVシャトルプラスミドにクローニングした。BJ5183細菌におけるpAdEasy-1ベクターと相同組換をさせるために,生成物を直線化した。PCR及び制限エンドヌクレアーゼ消化によって陽性クローンを同定し,Ad/pri-miR-155ウイルスをパッケージング及び増幅させるために,組換えアデノウイルスDNAを293FT細胞に形質移入した。その後ウイルスをCsCl密度勾配遠心分離によって精製した。感染させたA549細胞におけるmiR-155発現は,RT-PCR及びEGFP蛍光法によって確認した。miRBaseターゲットデータベースに従って,miR-155のターゲット配列及びその変異したターゲット配列を合成し,pGL3-Control/miR-155wt及びpGL3-Control/miR-155mutを作製するために,pGL3-Control Reportルシフェラーゼレポーターベクターに挿入した。これらをpRL-CMVと共にA549細胞に共形質移入し,Ad/pri-miR-155ウイルスあるいはAd/FK3対照ウイルスで感染させ,相対的ルシフェラーゼ活性を測定した。DNA配列決定の結果,pAdTrack-CMV/pri-miR-155の配列は正しかった。ヒト成熟miR-155の特異的発現はAd/pri-miR-155ウイルスで感染させた後A549細胞内でRT-PCR法によって同定した。二重ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果,成熟miR-155が生物活性を有するAd/pri-miR-155ウイルスで発現した。以上の結果から,hsa-pri-miR-155の組換えアデノウイルスの調製に成功し,A549細胞で効率よく発現したことを意味した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： *腫瘍細胞 ,  ヒト ,  *アデノウイルス科 ,  アンチセンスRNA ,  *生物活性 ,  PCR法 ,  培養細胞 ,  密度勾配遠心 ,  A549細胞 ,  バイオアッセイ ,  ヌクレオチド配列
準シソーラス用語： 293FT細胞 ,  miR-155 ,  レポータージーンアッセイ法 ,  肺癌細胞

分類 (1件)： ウイルスの生化学  (EG04030F)

タイトルに関連する用語 (8件)： 肺癌細胞 ,  組換え ,  HSA ,  miR-155 ,  アデノウイルス ,  構築 ,  発現 ,  同定