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J-GLOBAL ID：201102240192171092   整理番号：11A0922388

大腸菌におけるThermus thermophilusHB27発現,精製,および酵素学的特性化

Expression, purification and enzymatic characterization of adenylate kinase of Thermus thermophilus HB27 in Escherichia coli

著者 (5件)： TAN Zhi-wen (Inst. of Biochemistry, Zhejiang Sci-Tech Univ., Zhejiang, Hangzhou) ,  LIU jun (Inst. of Biochemistry, Zhejiang Sci-Tech Univ., Zhejiang, Hangzhou) ,  ZHANG Xue-fang (Inst. of Biochemistry, Zhejiang Sci-Tech Univ., Zhejiang, Hangzhou) ,  MENG Fan-guo (Yangtze Delta Region Inst. of Tsinghua Univ., Zhejiang, Jiaxing) ,  ZHANG Yao-zhou (Inst. of Biochemistry, Zhejiang Sci-Tech Univ., Zhejiang, Hangzhou)
資料名： Nanfang Yike Daxue Xuebao  (Nanfang Yike Daxue Xuebao)
巻： 30  号： 1  ページ： 1-6  発行年： 2010年 
JST資料番号： C2216A  ISSN： 1673-4254  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】高度好熱菌Thermus thermophilusHB27のアデニル酸キナーゼをコードする遺伝子をクローン化し,大腸菌に蛋白質を発現し,酵素学的特性化を行う。【方法】Thermus thermophilusHB27の全DNAからアデニル酸キナーゼをコードするDNAフラグメントを得て,ベクターpET-28aにクローン化した。PCR,制限エンドヌクレアーゼ消化,および配列分析で組換プラスミドを同定した。分光光度分析を用い,発現蛋白質の酵素学的特性化を行った。【結果】Thermus thermophilusHB27のアデニル酸キナーゼをコードする遺伝子がクローン化され,蛋白質が大腸菌BL21(DE3)に過剰発現した。酵素の最適反応pHと温度はそれぞれ,8.5と90°Cであった。ADPに対する組換アデニル酸キナーゼのKmは68.6μmol/Lで,V_(max)ADPは0.294mmol/(L/分)であった。環境温度70,80,90,または100°Cで7時間の条件下で,組換アデニル酸キナーゼは酵素活性が残存し,高耐熱性を有した。アデニル酸キナーゼ阻害剤AP5Aは,2.0mmol/Lの濃度で蛋白質の酵素活性を70%阻害し,ADPに対するKi値は46.39μmol/Lであった。【結語】Thermus thermophilusHB27のアデニル酸キナーゼをコードする遺伝子が首尾よくクローン化し,大腸菌に発現させた。本研究は,高耐熱性組換HB27アデニル酸キナーゼの潜在的利用の基礎を提供する。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： 大腸菌 ,  Thermus thermophilus ,  酵素 ,  *アデニル酸キナーゼ ,  遺伝子 ,  タンパク質 ,  フラグメント ,  クローン
準シソーラス用語： DNAフラグメント

分類 (1件)： 酵素一般  (EB09010D)

タイトルに関連する用語 (6件)： 大腸菌 ,  Thermus ,  発現 ,  精製 ,  酵素学 ,  特性化