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J-GLOBAL ID：201102247739996100   整理番号：11A1135951

マウスPD-1/PD-L1組換蛋白質の原核細胞における発現

Expression of mouse PD-1/PD-L1 recombinant protein in prokaryotic cells

著者 (4件)： QIN Xiao-lin (Inst. of Molecular Biology,Three Gorges Univ., Hubei, Yichang) ,  LIU Chao-qi (Inst. of Molecular Biology,Three Gorges Univ., Hubei, Yichang) ,  YANG Fan (Chemoradiation Dep.,the Second People’s Hospital of Yichang, Hubei, Yichang) ,  ZHENG Lan-ying (Dep. of Nursing,the People’s Hospital of Changyang Tujia Autonomous County, Hubei, Changyang)
資料名： Dier Junyi Daxue Xuebao  (Dier Junyi Daxue Xuebao)
巻： 31  号： 4  ページ： 385-389  発行年： 2010年 
JST資料番号： C2220A  ISSN： 0258-879X  CODEN： DJXUE5  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】組換蛋白質の生物活性を研究する基礎とするために,マウスのPD-1/PD-L1蛋白質のin vitroでの分子結合を確立し,ハイスループット薬物スクリーニングモデルを確立すること。【方法】原核生物発現プラスミドpET28(+)/mPDL-1およびpGEX-4 T/mPD-1をE.coli(大腸菌)BL21(DE3)に変換し,次にIPTGによって誘発させた。発現産物を,FPLC蛋白質精製設備またはゲル分離を用いる迅速アフィニティークロマトグラフィーによって精製した。ELISAおよびGSTプルダウンを用いてmPD-1とmPD-L1の間の相互作用を検出した。さらに,アラマルブルーを用いて混合リンパ球増殖における蛋白質混合物の役割を調べた。【結果】SDS-PAGEおよびウェスタンブロット分析により,組換蛋白質がうまく発現していることがわかった。次に,アフィニティークロマトグラフィー,ゲル分離およびリフォールディング,その他によって精製されたmPD-1およびmPD-L1蛋白質を得た。ELISAおよびGSTプルダウンにより,mPD-1およびmPD-L1蛋白質がin vitroで特異的結合活性を持つことがわかった。mPD-1/mPD-L1蛋白質のリンパ球増殖に対する影響は有意に低下した(P<0.05)。【結語】原核細胞内に発現した精製されたmPD-1蛋白質とmPD-L1蛋白質を用いて,マウスPD-1/PD-L1組換蛋白質モデルを確立することに成功し,ハイスループット薬物スクリーニングの基礎となる。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： マウス ,  実験動物 ,  組換タンパク質 ,  原核細胞 ,  *タンパク質 ,  *CD抗原 ,  *膜貫通タンパク質 ,  *スクリーニング ,  大腸菌 ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  ELISA ,  SDS-PAGE ,  ウェスタンブロット法 ,  ガラクトシド ,  チオ糖 ,  ピラノシド ,  有機硫黄化合物
準シソーラス用語： Escherichia coli ,  *PD-1 ,  *PD-L1 ,  ウェスタンブロット分析 ,  *ハイスループットスクリーニング

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  薬物の研究法  (GV01020U)

物質索引 (2件)： IPTG ,  アラマルブルー

タイトルに関連する用語 (6件)： マウス ,  PD-1 ,  PD-L1 ,  組換蛋白質 ,  原核細胞 ,  発現