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J-GLOBAL ID：201102277477902733   整理番号：11A1027397

Penicillium expansumの成熟リパーゼ遺伝子のクローニング,コドン最適化及び発現

Cloning,codon optimization and expression of mature lipase gene Penicillum expansum

著者 (5件)： Zhengping Zhang (Coll. of Life Sci. and Technol.,Huazhong Univ. of Sci. and Technol., Hubei, Wuhan) ,  Jiangke Yang (Coll. of Life Sci. and Technol.,Huazhong Univ. of Sci. and Technol., Hubei, Wuhan) ,  Li Xu (Coll. of Life Sci. and Technol.,Huazhong Univ. of Sci. and Technol., Hubei, Wuhan) ,  Yun Liu (Coll. of Life Sci. and Technol.,Huazhong Univ. of Sci. and Technol., Hubei, Wuhan) ,  Yunjun Yan (Coll. of Life Sci. and Technol.,Huazhong Univ. of Sci. and Technol., Hubei, Wuhan)
資料名： Weishengwu Xuebao  (Weishengwu Xuebao)
巻： 50  号： 2  ページ： 228-235  発行年： 2010年 
JST資料番号： C2382A  ISSN： 0001-6209  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]Penicillium expansum CICC40356リパーゼ(PEL)遺伝子cDNAをクローニングし,Pichia pastoris GS115で過剰発現させる。[方法]報告済みのPenicillum由来遺伝子のヌクレオチド配列に従ってプライマーを設計した。PELの10のレアコドン及びα-シグナルペプチドの9つをPCR法によって最適化した。ネイティブ遺伝子及びコドン最適化PEL遺伝子それぞれをpPIC9K,pPIC9KM及びpPIC3.5Kベクターにクローニングした。組換えリパーゼの性質を調べた。[結果]ヌクレオチド配列を解析した結果,PEL cDNAは858塩基対のオープンリーディングフレームを含有することが明らかになった。推定したアミノ酸配列は,286アミノ酸残基に相当し,20アミノ酸残基のシグナルペプチドを含有した。PELの加水分解活性は,コドン最適化によって増強した。最適温度及び最適pHは,35°Cと9.5であった。本酵素は中鎖(C_8~C_(12))を良好な基質とし,最適な活性は,C_8アシル鎖であった。Ca(2+)及びMg(2+)によって活性化されたが,EDTAで完全に阻害され,Fe(2+),Zn(2+)及びCu(2+)によって僅かに阻害を受けた。[結論]PELの活性は,野生型酵素に比べて2.3~2.5倍改善された。この結果からコドン最適化が,P.pastoris系における活性型PELを産生する効果的な手段であることを示唆している。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： *Penicillium ,  *リパーゼ ,  遺伝子発現 ,  Pichia ,  ヌクレオチド配列 ,  プライマー【遺伝】 ,  シグナルペプチド ,  コドン認識 ,  アミノ酸残基 ,  基質特異性
準シソーラス用語： *Penicillium expansum ,  Pichia pastoris

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子発現  (EC02040Q)

タイトルに関連する用語 (7件)： Penicillium ,  成熟 ,  リパーゼ ,  遺伝子 ,  クローニング ,  コドン最適化 ,  発現