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J-GLOBAL ID：201102282400229991   整理番号：11A1276946

ヒトngn3遺伝子の組換えレトロウイルスベクターの構築と同定,及びそのパッケージング細胞系

Construction and identification of recombinant retroviral vector of human ngn3 gene and its packaging cell line

著者 (5件)： Chu Yuankui (Shaanxi Branch of National Stem Cell Engineering&Technology Center, Lab. of Molecular Biology for Agriculture, Coll. ...) ,  Lv Changrong (Shaanxi Branch of National Stem Cell Engineering&Technology Center, Lab. of Molecular Biology for Agriculture, Coll. ...) ,  Chen Dongmei (Shaanxi Branch of National Stem Cell Engineering&Technology Center, Lab. of Molecular Biology for Agriculture, Coll. ...) ,  Cao Hui (Shaanxi Branch of National Stem Cell Engineering&Technology Center, Lab. of Molecular Biology for Agriculture, Coll. ...) ,  Dou Zhongying (Shaanxi Branch of National Stem Cell Engineering&Technology Center, Lab. of Molecular Biology for Agriculture, Coll. ...)
資料名： Shengwu Gongcheng Xuebao  (Shengwu Gongcheng Xuebao)
巻： 26  号： 4  ページ： 448-453  発行年： 2010年 
JST資料番号： C2184A  ISSN： 1000-3061  CODEN： SGXUED  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： ヒトngn3遺伝子の組換えレトロウイルスベクター及びそのパッケージング細胞系を構築するために,RT-PCRによりヒト胎児膵臓組織由来のngn3遺伝子の読取り枠(ORF)をうまく増幅した。ヒトngn3遺伝子のPCR産物をpMD18-Tベクターにサブクローニングし,配列決定した。その結果,その配列がGenBankに発表されたngn3遺伝子(GenBank受入番号No.BC126468)と完全に一致した。組換えpMD18-TベクターからEcoR I及びHpa Iにより的確な断片を分解し,レトロウイルスベクターpMSCV-neoの同じ制限酵素部位に挿入した。組換えレトロウイルスベクターpMSCV-ngn3を獲得し,二重制限酵素分解により同定し,次いで,リポフェクタミン2000によりPT67細胞にトランスフェクトした。G418選択によりPT67-ngn3パッケージング細胞系を構築し,RT-PCR及び免疫組織化学染色により検出した。検出結果から,パッケージング細胞系においてNgn3がmRNA及び蛋白質レベルで発現することを示した。RT-PCR検出及び電子顕微鏡分析から,組換えレトロウイルスベクターpMSCV-ngn3が感染性ウイルス粒子にパッケージされ,細胞上清に放出されることを示した。これらの結果から,PT67-ngn3パッケージング細胞系が成功裏に構築され,このことが,ngn3遺伝子を用いることによりインシュリン産生細胞へのヒト胎児膵臓前駆細胞の分化の研究を促進することを示した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： ヒト ,  *遺伝子 ,  *DNA組換 ,  ベクター ,  胎児 ,  膵臓 ,  遺伝子クローニング ,  培養細胞 ,  トランスフェクション ,  遺伝子発現 ,  細胞分化 ,  細胞 ,  ヌクレオチド配列 ,  ビリオン ,  ウイルス感染 ,  アミノ酸 ,  糖アルコール ,  デオキシ糖 ,  ピラノシド ,  枝分れ糖 ,  三糖類
準シソーラス用語： *ngn3遺伝子 ,  PT67細胞 ,  インシュリン産生細胞 ,  レトロウイルスベクター

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  細胞生理一般  (EF02010S)

物質索引 (1件)： G-418

タイトルに関連する用語 (9件)： ヒト ,  Ngn3 ,  遺伝子 ,  組換え ,  レトロウイルスベクター ,  構築 ,  同定 ,  パッケージング ,  細胞系