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J-GLOBAL ID：201102292594153627   整理番号：10A1370698

NMR研究に対するラットリポカリンタイププロスタグランジンDシンターゼのシステイン変異アイソフォームの発現と精製

Expression and purification of cysteine mutation isoforms of rat lipocalin-type prostaglandin D synthase for nuclear magnetic resonance study

著者 (6件)： Jiafu Liu (School of Life Sci. and Technol., China Pharmaceutical Univ., Nanjing) ,  Kejiang Lin (School of Life Sci. and Technol., China Pharmaceutical Univ., Nanjing) ,  Chenyun Guo (Shanghai Inst. of Materia Medica, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Acad. of Sciences, Shanghai) ,  Hongchang Gao (Shanghai Inst. of Materia Medica, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Acad. of Sciences, Shanghai) ,  Yihe Yao (Shanghai Inst. of Materia Medica, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Acad. of Sciences, Shanghai) ,  Donghai Lin (School of Life Sci. and Technol., China Pharmaceutical Univ., Nanjing)
資料名： Acta Biochimica et Biophysica Sinica  (Acta Biochimica et Biophysica Sinica)
巻： 40  号： 6  ページ： 489-496  発行年： 2008年 
JST資料番号： C2551A  ISSN： 1672-9145  CODEN： ABBSC2  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オーストラリア (AUS)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： リポカリンタイププロスタグランジン(PG)Dシンターゼ(L-PGDS)は,酵素活性を示す唯一のリポカリンスーパーファアミリーメンバーである。これは高親和性で親脂性リガンドに結合し,PGH_2のPGD_2への反応を触媒する。3個のシステイン残基Cys(65),Cys(89),およびCys(186)残基はジスルフィド結合を形成した。この研究で,著者らはこの蛋白質の構造に対するチオール基の影響を明らかにし,部位特異的変異誘発によりラットL-PGDSの構造的重要性を研究した。Cys残基をアラニンで置換することで4変異体を構築し,これら3残基間のジスルフィド結合の正しい形成を同定した。ラットL-PGDSの構造に対するチオール基の影響も,この変異体で同定した。HSQC実験の解析は,この酵素が良く規定された4次構造に全て適当に折り畳まれていることを示唆した。3DNMR溶液構造に向けての第1段階として,著者らは大腸菌でラットL-PGDS発現を最適化し,効率的で系税的な精製プロトコルを確立し,多量の純粋な同位元素標識ラットL-PGDSを得た。アサインメントの結果は,この実験系で得た野生型ラットL-PGDSは3DNMR溶液構造決定に適していることを示唆した。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST

シソーラス用語： NMR【磁気共鳴】 ,  *プロスタグランジンシンターゼ ,  *形態 ,  動物タンパク質 ,  ジスルフィド結合 ,  部位特異的変異誘発 ,  突然変異体 ,  メルカプト基 ,  大腸菌 ,  *組換タンパク質 ,  分子構造 ,  *アイソフォーム ,  *プロスタグランジンDシンターゼ ,  リポカリン ,  溶液構造【溶質】 ,  微生物
準シソーラス用語： チオール基

分類 (1件)： 細胞構成体一般  (EF03010Z)

タイトルに関連する用語 (11件)： NMR ,  研究 ,  ラット ,  リポカリン ,  タイプ ,  プロスタグランジンDシンターゼ ,  システイン ,  変異 ,  アイソフォーム ,  発現 ,  精製