特許
J-GLOBAL ID：201103040167594560
外来DNA断片由来の逆方向反復配列を含むDNA断片の調製方法及びDNA型RNAiライブラリの調製方法
発明者：
,
出願人/特許権者：
代理人 (1件)：
特許業務法人特許事務所サイクス
公報種別：公開公報
出願番号（国際出願番号）：特願2009-287565
公開番号（公開出願番号）：特開2011-125278
出願日： 2009年12月18日
公開日（公表日）： 2011年06月30日
要約：
【課題】種々の長さと配列を有する長鎖cDNAについて、一本の試験管内で同時的に高い形成率で逆方向反復配列を形成させることがでる方法、この方法を利用したDNA型RNAiライブラリの調製方法、このライブラリの利用方法を提供する。【解決手段】標的遺伝子DR構造を有するプラスミドの調製方法。(1)1つの標的遺伝子を有するプラスミド(プラスミドS:標的遺伝子の両側にニッキングエンドヌクレアーゼ認識部位を有し、各ニッキングエンドヌクレアーゼ認識部位の標的遺伝子側に、DR構造が形成された時に、その間のスペーサー領域に制限酵素認識部位が生成されるための制限酵素認識部位生成用部位を有する)を調製する工程、(2)プラスミドSにニックを生じさせる工程、(3)ニックを生じたプラスミドSに鎖置換反応及び引き続き行われるセルフライゲーション反応により、DR構造に変換した標的遺伝子を有するプラスミド(制限酵素認識部位生成用部位によって、2つの制限酵素認識部位が新たに形成される)を調製する工程、(4)標的遺伝子DR構造を有するプラスミドを含むプラスミド群を、宿主に導入し、得られた形質転換体を用いてクローニングする工程、(5)クローニングしたプラスミド群を新たに形成された2つの制限酵素認識部位に対する2つの制限酵素で消化する工程、および(6)消化したプラスミド群から、制限酵素で消化されて直鎖状になったプラスミドを回収する工程、を含む。【選択図】なし
請求項（抜粋）：
標的遺伝子ダイレクトリピート(以下、DRと表記する)構造を有するプラスミドの調製方法であって、
(1)1つの標的遺伝子を有するプラスミド(プラスミドSと呼ぶ)を調製する工程、
但し、前記プラスミドSは、標的遺伝子の両側のそれぞれにニッキングエンドヌクレアーゼ認識部位を有し、かつ各ニッキングエンドヌクレアーゼ認識部位の標的遺伝子側に、DR構造が形成された時に、その間のスペーサー領域に制限酵素認識部位が生成されるための一部配列(制限酵素認識部位生成用部位)を有する、
(2)前記プラスミドSにニックを生じさせる工程、
(3)ニックを生じたプラスミドSに鎖置換反応及び引き続き行われるセルフライゲーション反応により、DR構造に変換した標的遺伝子を有するプラスミドを調製する工程、
但し、調製した標的遺伝子DR構造を有するプラスミドには、前記制限酵素認識部位生成用部位によって、2つの制限酵素認識部位が新たに形成される、
(4)標的遺伝子DR構造を有するプラスミドを含むプラスミド群を、宿主に導入し、得られた形質転換体を用いてクローニングする工程、
(5)クローニングしたプラスミド群を前記新たに形成された2つの制限酵素認識部位に対する2つの制限酵素で消化する工程、および
(6)消化したプラスミド群から、制限酵素で消化されて直鎖状になったプラスミドを回収する工程、
を含む、標的遺伝子DR構造を有するプラスミドの調製方法。
IPC (6件)：
C12N 15/113
, C12N 15/09
, C12N 5/10
, C12N 1/19
, C12Q 1/68
, C12Q 1/02
C12N15/00 G
, C12N15/00 A
, C12N5/00 102
, C12N5/00 103
, C12N1/19
, C12Q1/68 A
, C12Q1/02
4B024AA11
, 4B024AA20
, 4B024BA11
, 4B024CA01
, 4B024CA09
, 4B024CA11
, 4B024DA02
, 4B024EA04
, 4B024FA02
, 4B024FA07
, 4B024FA13
, 4B024GA11
, 4B024HA14
, 4B063QA18
, 4B063QQ08
, 4B063QQ33
, 4B063QQ42
, 4B063QQ52
, 4B063QR13
, 4B063QR32
, 4B063QR35
, 4B063QR55
, 4B063QR77
, 4B063QS34
, 4B063QX02
, 4B065AA72X
, 4B065AA88X
, 4B065AA90X
, 4B065AA90Y
, 4B065AB01
, 4B065AC14
, 4B065BA01
, 4B065CA23
, 4B065CA46
